[发明专利]分离基质和分离方法

说明书

本发明公开了包含多糖凝胶珠的分离基质，其中所述多糖凝胶珠包含嵌入的纤维。本发明进一步公开了制备所述分离基质的方法和所述基质用于分离目的的用途。

发明的技术领域

本发明涉及分离基质颗粒，更特别地涉及用于分离生物制剂(如蛋白质、核酸和病毒)的包含嵌入的纤维的基于多糖的色谱基质。

发明背景

在生物药物(如疫苗、抗体、重组蛋白、基因治疗载体等)的制造中，通常需要几个色谱分离步骤以从产物中去除各种污染物和杂质。这些分离步骤增加了显著的成本和过程时间，因此对强化分离存在显著的兴趣，例如通过增加结合能力和/或增加流速。因此，需要具有足够刚性以适应高流速的分离基质。

通常，色谱分离在填充有凝胶珠形式的分离基质的柱中进行。一个实例是尺寸排阻色谱法(SEC)。分离大的生物实体(例如大的蛋白质或病毒)需要具有大孔的珠。然而，大孔可能导致较低的刚性，并且分离基质可能在高流速下坍塌。因此，通常的实践是使聚合物交联以使其更稳定并增加刚性。这样的交联发生在多糖羟基和交联剂的官能团之间。在EP203049中描述了使用包含掩蔽官能团的单官能交联剂来改进凝胶珠的刚性的方法。在另一个实例中，在WO97/38018中描述了用于交联多糖凝胶以获得大孔和高刚性的制造方法，其包括在凝胶形成之前将交联剂引入到多糖溶液中的步骤。在这些方法中，交联导致多糖链之间的桥。使用交联的琼脂糖的商品的实例是Superose^TM (GE Healthcare的商标)。Superose的刚性甚至允许粘性洗脱剂(例如8 M尿素)以可行的流速运行。因此，使用交联剂(如表氯醇、双环氧化物、烯丙基缩水甘油醚、烯丙基溴和二乙烯基砜)化学交联多糖凝胶珠是制备用于色谱分离的具有改进的刚性的分离基质的确定方法。

发明概述

本发明的一个方面提供分离基质，其表现出高孔隙率和/或高刚性，用于生物制剂(如蛋白质、核酸和病毒)的改进的分离。这通过包含多糖凝胶珠的分离基质实现，其中所述多糖凝胶珠包含嵌入的纤维。

本发明的第二方面提供通过将至少一种可胶凝的多糖的水性溶液与纤维混合，并形成所述水性溶液的凝胶珠来制造所述分离基质的方法。

本发明的第三方面提供所述分离基质用于纯化、分离或去除目标化合物的用途。

本发明的其它合适的实施方案在从属权利要求中描述。

附图简述

图1显示包含嵌入的纤维素纤维的琼脂糖凝胶珠的显微镜图像。纤维以琼脂糖干重的6%的浓度嵌入，并且琼脂糖浓度为2% (水重量的2%)。微原纤化纤维素分散在凝胶珠中。白色比例尺表示200 µm。

图2显示加入纤维素改变分离基质的耐压缩性。较低的压缩是较高的凝胶珠刚性的指示。琼脂糖的最终浓度为4% (水重量的4%)。

图3显示对于四种分析物的K_D值和峰分子量(Mp)的对数。较高的K_D值表示对于分析物的较大可用孔体积。较大的log(Mp)指示较大的分析物。“CL琼脂糖”是交联的烯丙基化琼脂糖的简短标记。

定义