[发明专利]嵌合抗原受体的肿瘤环境特异性表达

说明书

一种肿瘤微环境(TME)响应性表达载体，其包含编码合成的启动子的核酸序列和编码免疫效应物基因诸如嵌合抗原受体的核酸序列，所述合成的启动子包含一个或更多个启动子响应元件。TME响应性载体被设计成诱导免疫效应物基因在TME内而非正常健康组织中表达，从而聚焦免疫活性、增加安全性并降低靶点非肿瘤效应(ON‑target OFF‑tumor)的风险。

发明领域

本公开内容一般涉及嵌合抗原受体(CAR)表达的领域，具体涉及肿瘤组织特异性CAR表达。

背景

近年来，利用免疫系统消除癌症已被证明非常有效。

一个实例是工程化免疫细胞，诸如嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)，其在显示出关于消除没有其他有效疗法的恶性肿瘤的能力方面的杰出结果后被FDA批准用于治疗多种癌症。

然而，尽管表达CAR的免疫细胞可以到达肿瘤以及遍及患者体内的转移瘤，工程化受体的特异性不允许完全区分肿瘤细胞与正常细胞(仅有少数例外)，因为肿瘤通常不具有未被体内的一些正常细胞表达的绝对独特的抗原。因此，若干种CAR治疗引起类似于GVHD的毒性免疫应答，以及甚至在临床试验期间由CAR治疗导致的死亡。

已经进行了在工程化免疫细胞内实现CAR的非组成型表达的尝试。一个实例包括通过利用仅在外源提供的分子(诸如四环素/多西环素)存在下活化的启动子，在CAR表达载体中应用“开启-关闭(ON-OFF)开关”。尽管允许在不良症状明显的情况下关闭CAR表达，但这种方法也关闭了CAR T细胞针对肿瘤细胞的正向活性，并且从而终止有效的CAR治疗。

因此，对降低CAR表达的威胁生命的“副作用”的风险同时允许有效消除肿瘤的受控制的CAR表达仍存在未被满足的需求。

概述

描述了以下实施方案及其方面并结合组合物和方法来说明，这些组合物和方法意为示例性和说明性的，而不限制范围。在多种实施方案中，一种或更多种上述问题被减少或消除，而其他实施方案涉及其他优点或改进。

根据一些实施方案，提供了用于在肿瘤微环境响应性启动子(任选地与tet响应回路联合)的控制下调控效应物基因表达的新平台。

该平台包含肿瘤环境(TME)响应性表达载体，该肿瘤环境(TME)响应性表达载体包含编码合成的启动子的核酸序列，该合成的启动子包含一个或更多个TME依赖性启动子响应元件(response element)；与效应物基因，诸如但不限于编码效应物基因(例如CAR)的核酸序列缀合。

有利地，TME响应性载体被设计成使得TME中存在的一种或更多种因子与启动子响应元件的结合直接或间接诱导通过该启动子的表达。在TME因子结合不存在的情况下，启动子表达在每个工程化细胞内被自动下调。这有利地确保了在不同于肿瘤的组织环境的组织环境中存在效应物机制诸如CAR的最低表达至无表达；而在肿瘤环境中，效应物机制诸如CAR的表达被上调，并在使正常组织不受伤害的同时指导针对肿瘤的活性。

根据一些实施方案，表达载体可以包含多于一种TME依赖性启动子响应元件。这可以用于确保最高表达水平仅在TME因子的特定组合存在的情况下获得。

有利地，我们还可以任选地将合成的启动子替代/改变为定制的启动子，使得被配置为活化启动子的一个或更多个TME依赖性启动子响应元件将适合特定患者或患者组的实际TME特征，从而确保最特异且有效的响应。

根据一些实施方案，提供了肿瘤微环境(TME)响应性表达载体，其包含编码合成的启动子的核酸序列，所述启动子包含一个或更多个TME依赖性启动子响应元件(PRE)；和编码效应物基因的核酸序列；其中所述TME响应性表达载体被设计成使得TME中存在的一种或更多种TME因子与启动子响应元件的结合诱导效应物基因的表达，并且其中在一种或更多种TME因子与启动子响应元件的结合不存在的情况下，低的效应物基因被表达或基本上没有效应物基因被表达。