[发明专利]纯化单体单克隆抗体的方法

说明书

在某些实施方案中，本发明提供一种从包含单体单克隆抗体和一种或多种污染物的混合物中纯化该单体单克隆抗体的方法，其包括：a)使所述混合物经历阳离子交换色谱(CEX)基质，其中所述单体单克隆抗体与所述CEX基质结合；b)使所述CEX基质与pH在约7至约7.8之间的洗涤溶液接触；c)将所述单体单克隆抗体从所述CEX基质洗脱到洗脱溶液中，从而纯化所述单体单克隆抗体。

相关申请的交叉引用

本申请要求保护2018年3月29日提交的美国临时申请号62/649,976的权益，其全部内容通过引用而并入本文。

发明背景

蛋白质的大规模、经济纯化对于生物制药工业而言是日益重要的问题。通常，使用原核或真核细胞系生产治疗性蛋白，所述原核或真核细胞系经工程化以从包含编码该蛋白质的基因的重组质粒表达该感兴趣的蛋白质。从补给给细胞的组分混合物、细胞副产物和该蛋白质的聚集形式中分离出所期望的蛋白质，使其具有足够的纯度，例如足以用作人治疗剂的纯度，这对生物制剂制造商提出了巨大的挑战。

因此，在本领域中需要可用于加速基于蛋白质的治疗剂(诸如抗体)的大规模处理的替代性蛋白质纯化方法。

发明概述

在某些实施方案中，本发明提供了一种从包含感兴趣的蛋白和一种或多种污染物的混合物中纯化感兴趣的单体蛋白质的方法。

在某些特定的实施方案中，本发明提供了一种从包含单体单克隆抗体和一种或多种污染物的混合物中纯化单体单克隆抗体(例如，抗IP10单克隆抗体)的方法，该方法包括：a)使混合物经历阳离子交换色谱(CEX)基质，其中所述单体单克隆抗体与所述CEX基质结合；b)使所述CEX基质与pH在约7至约7.8之间的洗涤溶液接触；c)将所述单体单克隆抗体从所述CEX基质洗脱到洗脱溶液中，从而纯化所述单体单克隆抗体。为了说明，污染物选自单克隆抗体的聚集体、宿主细胞蛋白、宿主细胞代谢产物、宿主细胞组成性蛋白、核酸、内毒素、病毒、产物相关污染物、脂质、培养基添加剂和培养基衍生物。例如，抗IP10单克隆抗体的聚集体包括二聚体、多聚体和中间体聚集体种类。任选地，所述中间体聚集体种类在步骤(b)中被去除。

在某些方面，混合物选自收获的细胞培养液、细胞培养物上清液和条件细胞培养物上清液、细胞裂解物和澄清的原液。例如，细胞培养物是哺乳动物细胞培养物，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养物。

在某些方面，本方法的混合物已经通过亲和色谱(例如，蛋白A亲和色谱)获得。任选地，来自CEX步骤的洗脱溶液不经历第二色谱步骤。任选地，来自CEX步骤的洗脱溶液进一步经历第二色谱步骤，如离子交换色谱、疏水相互作用色谱和混合模式色谱。

在某些方面，洗涤溶液的pH在约7.2与约7.6之间(例如，7.2、7.3、7.4、7.5、7.6)。任选地，洗涤缓冲液的盐浓度在约20与40mM之间，如在约24与30mM之间。

在某些方面，抗IP10单克隆抗体包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。在某些方面，抗IP10单克隆抗体包含分别为SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。为了例示性说明，抗IP10单克隆抗体包含SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。为了说明，抗IP10单克隆抗体包含分别为SEQ ID NO:4和9的重链可变区序列和轻链可变区序列。为了例示性说明，抗IP10单克隆抗体包含分别为SEQ ID NO:5和10的全长重链氨基酸序列和全长轻链氨基酸序列。

在某些具体的实施方案中，单体抗IP10单克隆抗体被纯化至至少90％的单体纯度，任选地至少95％的单体纯度，或任选地至少99％的单体纯度。

附图简述

图1显示了抗IP10 mAb CEX盐梯度(在50mM乙酸中0mM至300mM NaCl，pH 5.5)。