[发明专利]用于在悬浮培养物中分化人多能干细胞系的方法

权利要求书

1.一种将多能干细胞分化为造血前体细胞的方法，其中所述方法在悬浮搅动下进行，并且其中在中胚层诱导阶段期间加入GSK-3-抑制剂或Wnt通路激活剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述将多能干细胞分化为造血前体细胞的方法包括以下阶段：

a.中胚层诱导阶段；

b.造血诱导阶段；

c.成红细胞诱导阶段；以及

d.成红细胞成熟阶段。

3.如权利要求2所述的方法，其中在所述多能干细胞扩增阶段期间，将多能干细胞扩增至1.5×10⁵至4×10⁶细胞/ml的浓度。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述中胚层诱导阶段导致在来自所述多能干细胞扩增阶段的多能干细胞中诱导中胚层形成，产生KDR⁺PDGFRα-造血前体细胞。

5.如权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述造血诱导阶段导致来自中胚层诱导阶段的造血前体细胞扩增，产生CD34/CD43/CD45造血祖细胞。

6.如权利要求2至5中任一项所述的方法，其中所述成红细胞扩增阶段导致来自所述造血诱导阶段的造血祖细胞扩增，产生CD235a⁺CD71⁺成红细胞。

7.如权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述成红细胞成熟阶段导致来自所述成红细胞扩增阶段的成熟的CD235a⁺成红细胞的终末成熟和去核，产生去核的CD235a⁺成红细胞。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述方法包括在所述中胚层诱导阶段期间使用细胞培养基，所述细胞培养基包含：

■骨形态发生蛋白，

■GSK3-抑制剂或Wnt通路激活剂，

■激活素A，和

■血管内皮生长因子。