[发明专利]利拉鲁肽、索马鲁肽和GLP-1的化学酶促合成

权利要求书

1.一种用于合成肽的方法，所述肽包含序列His-X-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly，所述方法包括将以下(a)和(b)酶促偶联：

(a)包含第一肽片段的肽C末端酯或硫酯，所述第一肽片段包含序列His-X-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-(硫)酯；以及

(b)具有包含第二肽片段的N末端未保护的胺的肽亲核试剂，所述第二肽片段包含序列H-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly

其中

-X是Ala或α-氨基-异丁酸(Aib)残基；

-Y是Lys，所述Lys具有游离侧链ε-氨基基团或所述Lys的侧链ε-氨基基团被保护基团保护或所述Lys的侧链ε-氨基基团被氨基酸或另一种官能团官能化，特别是选自由以下组成的组的官能团官能化：γ-Glu-OH、Pal-γ-Glu-OH、AEEA-AEEA-γ-Glu-OH和AEEA-AEEA-γ-Glu-N-17-羧基十七烷酰基-OH，

其中Pal是棕榈酰基并且AEEA-AEEA是-2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰基-2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰基；

-Z是Arg或Lys；

所述酶促偶联通过连接酶进行催化。

2.根据权利要求1所述的方法，其中合成的所述肽是利拉鲁肽。

3.根据权利要求2所述的方法，所述方法包括通过连接酶催化将以下(a)和(b)酶促偶联：

(a)包含以下序列的肽C末端酯或硫酯：His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-(硫)酯，和

(b)包含以下序列的肽亲核试剂：H-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly，其中Y是Lys(Pal-γ-Glu-OH)。

4.根据权利要求2所述的方法，所述方法包括通过连接酶催化将以下(a)和(b)酶促偶联：

(a)由式P-W_v-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-(硫)酯表示的肽C末端酯或硫酯，

其中P是保护基团，v是具有至少为0的值的整数，优选为1-5，更优选为1-3，最优选为1，并且每个W独立地表示相同的或不同的氨基酸残基，和

(b)包含以下序列的肽亲核试剂：H-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(γ-Glu-OH)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly；并且然后

提供所述具有棕榈酰基基团(Pal)的Lys(γ-Glu-OH)。

5.根据权利要求2所述的方法，所述方法包括通过连接酶催化将以下(a)和(b)酶促偶联：

(a)包含以下序列的肽C末端酯或硫酯：His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-(硫)酯，和

(b)包含以下序列的肽亲核试剂：H-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly，其中Y是具有游离ε-氨基侧链的赖氨酸残基；并且然后提供所述具有Pal-γ-Glu-OH的氨基侧链。

6.根据权利要求1所述的方法，其中合成的所述肽是索马鲁肽。