[发明专利]用于治疗Angelman综合征的方法和组合物

说明书

本发明涉及用于治疗Angelman综合征的方法和组合物，其包括向受试者施用有效量的成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）相关的核酸内切酶以及一种或多于一种引导RNA分子，所述引导RNA分子与受试者的细胞中的UBE3A‑ATS中的靶核苷酸序列具有互补性。

优先权声明

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2018年2月27日提交的美国临时申请序列号62/635,815的利益，所述美国临时申请的全部内容引入本文作为参考。

政府支持的声明

本发明在由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的资助号ES024088的政府支持下完成。政府拥有本发明的某些权利。

发明领域

本发明涉及用于治疗Angelman综合征的方法和组合物。

关于电子提交序列表的声明

替代纸质副本提供了以ASCII文本格式的序列表，其根据37C.F.R.§1.821提交，名称为5470-839WO_ST25.txt，大小为577,227字节，于2019年2月27日生成并经由EFS-Web提交。该序列表就其公开内容在此引入本说明书作为参考。

发明背景

Angelman综合征(AS)是由UBE3A的母系等位基因的缺失或突变引起的严重神经发育障碍。UBE3A在身体的几乎所有细胞中双等位基因表达，除了成熟神经元之外，其中父系等位基因由称为UBE3A-ATS的超长非编码RNA沉默。按照这种生物学，治疗与AS相关的神经和行为功能障碍的最直接方法是使完整的父系UBE3A等位基因不沉默。CRISPR/Cas9技术可以用于永久修饰哺乳动物基因组的特定区域，例如当使用活性Cas9时。CRISPR/Cas9技术也可以用于阻遏在哺乳动物基因组的特定区域处的转录，例如当无效的Cas9单独使用或与阻遏物结构域融合时。

本发明通过提供用于治疗神经发育障碍例如Angelman综合征的方法和组合物，克服了本领域中的先前缺点。

发明概述

在一个方面，本发明提供了使有此需要的人受试者中的父系UBE3A不沉默的方法，其包括向受试者施用有效量的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)相关的核酸内切酶(其是催化活性或无活性的/无效的)以及一种或多于一种引导RNA(gRNA)分子，所述引导RNA分子与受试者的细胞中的UBE3A-ATS中的靶核苷酸序列具有互补性。

在一个进一步方面，本发明提供了治疗有此需要的受试者中的Angelman综合征(AS)的方法，其包括向受试者施用有效量的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)相关的核酸内切酶(其是催化活性或无活性的/无效的)以及一种或多于一种引导RNA分子，所述引导RNA分子与受试者的细胞中的UBE3A-ATS中的靶核苷酸序列具有互补性。

附图简述

图1.使完整的父系UBE3A等位基因不沉默的分子途径。

图2A-B.(2A)Ube3a-ATS经由转录干扰/碰撞机制阻断了神经元中的父系Ube3a。(2B)边界元件截断了非神经元细胞中的Ube3a-ATS。X＝甲基化/印迹区域。

图3A-D.(3A)在gRNA文库中gRNA相对于基因和调控元件的位置。(3B)基因注释。(3C)来自皮层神经元的Ribozero RNA-seq。(3D)调控元件标记。