[发明专利]新型启动子及其应用

说明书

本申请涉及新型启动子及使用该启动子生产L‑氨基酸的方法。

技术领域

本公开涉及新型启动子和使用该启动子制备目的产物的方法。

背景技术

对细胞内机制的认识随着技术进步提高，指导开发通过调控细胞代谢生产各种目的产物的方法。目前，属于埃希氏菌属(genus Escherichia)或棒杆菌属(genusCorynebacterium)的微生物被最频繁地使用且直接地用于生产各种低分子或高分子量化合物、和蛋白质药物(如氨基酸)、多酚、类黄酮、抗体和天然橡胶。

在各种调控代谢的方法中，主要研究高效的基因表达系统以诱导目的基因的过表达。例如，由于众所周知启动子是参与基因表达的最重要的要素，因此使用来源于大肠杆菌(E.coli)的几个启动子(Ptac、Ptrc和Plac)进行了广泛的研究。此外，本公开的申请人通过先前的研究(韩国专利公开公告号10-2006-0068505)发现来源于产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)的cj1启动子显示出大肠杆菌tac启动子活性的296％的强活性。然而，仍然需要开发高效地以高收率生产目的产物的方法。

发明内容

[技术问题]

作为深入研究以开发通过增加目的基因的表达来有效生产目的产物的方法的结果，本发明人通过修饰已知具有高度活性的现有cj1启动子的序列制作了新型启动子(cj2.2)，并且已经鉴定出新型启动子具有比cj1启动子高约3倍或更高的活性，由此完成本公开。

[技术方案]

本公开的目的是提供具有启动子活性的多核苷酸，其包括SEQ ID NO:1的多核苷酸序列。

本公开的另一个目的是提供载体，其包含具有启动子活性的多核苷酸。

本公开的又一个目的是提供载体被引入其中的宿主细胞。

本公开的又一个目的是提供生产目的物质的方法，该方法包括培养宿主细胞；以及从宿主细胞或培养宿主细胞的培养基中回收目的物质。

[技术效果]

由于根据本公开的新型启动子可被引入到微生物中，导致与其连接的基因的表达水平和活性增加，因此可高效地产生受启动子和基因影响的目的产物。

附图说明

图1是示例在根据本公开的实施方式构建的重组载体变体文库的单个克隆中表达的绿色荧光蛋白的荧光强度的分析结果的图表，其中cj1是包含cj1启动子的克隆，且M1至M20是文库的单个克隆。

图2是根据本公开的实施方式制备的包含cj2.2启动子和metZ基因的载体的酶切图(cleavage map)。

图3是根据本公开的实施方式制备的包含cj2.2启动子和opss基因的载体的酶切图。

具体实施方式

以下，将详细描述本公开。同时，本公开中公开的每个描述和实施方式可在本文中应用于描述不同的描述和实施方式。换句话说，本公开中公开的各种组成部分的所有组合都包括在本公开的范围内。此外，本公开的范围不应受下面提供的详细描述的限制。

本公开的一方面提供具有启动子活性的多核苷酸，其包括SEQ ID NO:1的多核苷酸序列。

如本文所用，术语“启动子”是指未翻译的核苷酸序列，其包含聚合酶的结合位点，位于编码区上游，并具有将启动子-目的基因起始转录成mRNA的活性，即，表明当聚合酶与其结合时导致特定基因的转录起始的DNA区域。启动子可能位于mRNA转录起始位点的5’区域。