[发明专利]一种重组G-17蛋白、编码该重组蛋白的基因及其应用

说明书

本发明提供了一种重组G‑17蛋白、编码该重组蛋白的基因及其应用，所述重组G‑17蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码所述重组G‑17蛋白的基因的碱基序列如SEQ ID NO:2所示。本发明将G‑17抗原表位序列通过柔性片段与胰岛素瘤相关蛋白IA‑2的B细胞表位和P277的C端的Th2细胞表位的序列连接后，形成重组G‑17蛋白氨基酸序列；使用所述重组G‑17蛋白免疫小鼠，ELISA检测抗体滴度值达到1：10⁶，从而实现了对G‑17的特异性检测识别，既增强了检测灵敏度，又不会导致检测结果失真，为后续筛选高特异性的抗体提高了几率，节省了时间和经济成本。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，特别涉及一种重组G-17蛋白、编码该重组蛋白的基因及其应用。

背景技术

胃泌素是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中，95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34，其中80％～90％是G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标，其与胆囊收缩素受体(cholecystokininreceptor，CCKR)结合后通过一系列信号转导而发挥生物学效应，主要参与刺激胃酸分泌及营养胃肠道黏膜，近年研究表明G-17还有促进细胞增殖和抑制凋亡的作用。G-17可以提示患者胃黏膜的功能状态，与反映胃底胃体部萎缩的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II及其比值已被科技部列为早期胃癌筛查项目之一，因此G-17在胃肠疾病的诊断中具有重要意义。

目前，常规G-17单克隆抗体制备所使用的免疫原是基因工程技术表达的完整蛋白，仅含17个氨基酸(Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp MetAsp Phe)，使用G-17全长多肽作为免疫原，分子量太小难以制备得到高亲和力的单克隆抗体。并且使用偶联物抗原制备杂交瘤抗体过程中，筛选抗体假阳率高。

人类和动物同样存在两个辅助性T淋巴细胞亚群，Th1细胞主要产生Th1类细胞因子IL-2、TNF-β和IFN-γ；Th2细胞主要产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。正常情况下，辅助性T淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞处于平衡状态，但机体发生功能异常时，常表现出平衡偏向其中一方，此即为″Th1/Th2平衡漂移″。习惯上把Th1及其细胞因子占优势的状态称为Th1状态，Th2及其细胞因子占优势的状态称为Th2状态。表位是蛋白质抗原性的基础，蛋白质抗原通过表位体现其免疫特性，就某一蛋白质而言，它含有多种表位如B细胞表位又称抗原决定簇(antigenic determinant，AD)，T辅助细胞(Th)表位等等，还有抑制性表位，毒性表位，交叉反应性表位等等。选择合适的表位并且通过合适的方法与其他肽或者蛋白质等连接以及用什么佐剂及剂型，如何免疫等等才能得到理想的多肽和蛋白疫苗，产生特异的高效价(高滴度)抗体是有巨大的挑战性的。小鼠体内Th1会产生IgG2a亚型抗体，Th2型则会产生IgG1和IgG2b亚型抗体，Th2亚型抗体可以增加Th2型细胞因子的产生并能治疗Th1偏高疾病，缓解病症。