[发明专利]一种重组G-17蛋白、编码该重组蛋白的基因及其应用

权利要求书

1.一种重组G-17蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种编码如权利要求1所述重组G-17蛋白的基因，其特征在于，所述基因的碱基序列如SEQ ID NO:2所示。

3.含有权利要求2所述基因的重组表达载体。

4.含有权利要求2所述基因的转基因重组大肠杆菌菌株。

5.如权利要求2所述基因在制备重组G-17蛋白中的应用。

6.如权利要求1所述重组G-17蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将含有如权利要求2所述基因的pMD19-T载体和pET-28a(+)载体分别通过限制性内切酶NcoI和EcoRI双酶切，酶切产物分别进行琼脂糖凝胶电泳，并分别切胶回收目的基因和pET-28a(+)载体，将回收的目的基因和pET-28a(+)载体按一定比例连接后，得到的连接产物转化DH5α感受态细胞，并涂布于含卡那青霉素抗性的LB平板，培养后，于平板上挑取单克隆菌株至含卡那青霉素抗性的LB液体培养基，经培养后提取质粒，再经NcoINcoI和EcoRI双酶切鉴定后得到正确的重组表达载体；

(2)将步骤(1)构建好的重组表达载体转化E.coli BL21 DE3感受态细胞，并涂布于含卡那青霉素抗性的LB平板，过夜培养；次日，挑取平板上单克隆菌株至含卡那青霉素抗性的LB液体培养基，恒温摇床培养后，加诱导剂诱导表达后制备蛋白电泳样品，电泳结果表明重组蛋白成功表达，得到重组G-17蛋白表达菌株；

(3)接种步骤(2)得到的重组G-17蛋白表达菌株至LB液体培养基，加卡那青霉素，恒温摇床培养后，用含卡那青霉素的LB液体培养基将该菌稀释后，分装至细菌培养瓶中，置恒温摇床培养至OD600＝0.8，加诱导剂继续培养诱导，离心收集菌体，低温超声破菌，低温离心后取上清通过镍琼脂糖亲和层析柱，经洗涤、洗脱最终得到所述的纯化重组G-17蛋白。

7.如权利要求1所述重组G-17蛋白的应用，其特征在于，所述重组G-17蛋白可用于特异性检测识别G-17。