[发明专利]一种均相化学发光检测方法及其应用

权利要求书

1.一种均相化学发光检测方法，其包括以下步骤：将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物及第四组合物相接触，形成待测混合物；提供激发光至少一次照射所述待测混合物，并检测由此产生的化学发光信号强度，从而判断被分析物是否存在和/或被分析物的浓度；其中，

第一组合物包含第一受体以及与之结合的第一抗体或其结合片段，所述第一抗体或其结合片段是特异性结合被分析物的第一表位的检测抗体；

第二组合物包含第二受体以及与之结合的第二抗体或其结合片段，所述第二抗体或其结合片段是特异性结合被分析物的第二表位的检测抗体；

所述受体能够与活性氧作用产生化学发光；

所述第一表位和所述第二表位没有重叠部分；

所述第一抗体或其结合片段与被分析物特异性结合的亲和力高于所述第二抗体或其结合片段与被分析物特异性结合的亲和力；同时，

第一抗体或其结合片段与所述第一受体的质量比要低于所述第二抗体或其结合片段与第二受体得质量比；

所述第三组合物包括第三抗体或其结合片段，所述第三抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物、且其结合位点不与所述第一和第二表位重叠的捕获抗体；所述第三抗体或其结合片段与特异性结合配对成员中的一员结合；

所述第四组合物包含在激发光照射下可产生活性氧的供体，所述供体与特异性结合配对成员中的另一员结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗体或其结合片段与所述第一受体的质量比为1:(10～200)，优选为1:(20～180)，更优选为1:(40～160)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的浓度高于所述第二组合物在所述试剂中的浓度。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的质量浓度与所述第二组合物在所述试剂中的质量浓度比为(5～100):1，优选为(10～50):1，更优选为(15～25):1。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的质量浓度为5～500ug/ml，优选为10～250ug/ml，更优选为15～200ug/ml。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物与所述第二组合物单独分散在同一种缓冲液中。

7.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物与所述第二组合物混合后分散在一种缓冲液中组装成一种试剂。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一受体和第二受体均为含有高分子聚合物载体的受体微球，且第一受体微球的平均粒径与第二受体微球的平均粒径相同。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第一受体微球的平均粒径与所述第二受体微球的平均粒径不同。

10.根据权利要求1-9中任意一项所述的方法，其特征在于，所述被分析物为大分子抗原；优选地，所述大分子抗原上具有三种以上的表位。

11.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其特征在于，先将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物接触，然后再向其中加入第四组合物。

12.根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其特征在于，将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物及第四组合物相接触后，在30～40℃下温育形成待测混合物。

13.一种如权利要求1-12中任意一项所述的方法在化学发光分析仪中的应用。