[发明专利]一种裂殖壶菌发酵产DHA的方法

权利要求书

1.一种裂殖壶菌发酵产DHA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)裂殖壶菌经活化、扩培和发酵之后得到发酵液；

(2)将所述发酵液部分放料至酶解罐中酶解，再将得到的酶解液转移至分离设备，提取DHA毛油，菌粕回收待用；

(3)剩余发酵液补充部分培养基成分和所述回收待用的菌粕，继续发酵，重复步骤(2)直至发酵周期结束。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述部分放料为将发酵罐体积的20～70％的发酵液放料至酶解罐中，优选为40～50％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养基成分包括碳源；

优选地，所述碳源选自葡萄糖、甘油、果糖、木糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉糖化液或木质纤维素糖化液中的任意一种或至少两种的组合，优选为葡萄糖；

优选地，补加后发酵液中碳源浓度达到发酵培养基中碳源质量浓度的20～50％；

优选地，步骤(3)中所述继续发酵时间为60-72h；

优选地，步骤(3)中所述发酵周期为490～745h；

优选地，所述发酵周期中进行8～10次放料。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养基成分还包括氮源；

优选地，所述氮源选自花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、酵母浸膏、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、蛋白胨、麸皮或谷氨酸钠中的任意一种或至少两种的组合，优选为谷氨酸钠和/或酵母浸膏；

优选地，所述氮源与菌粕一起补入剩余发酵液中；

优选地，补加后发酵液中氮的质量浓度达到发酵培养基中氮质量浓度的60～80％。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述扩培的温度为25～30℃；

优选地，步骤(1)中所述扩培的时间为48～96h；

优选地，步骤(1)中所述发酵时的接种量为发酵培养基体积的10～30％，优选为16～30％；

优选地，步骤(1)中所述发酵时间为72-96h；

优选地，步骤(1)中所述发酵温度为25～30℃。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述酶解所用的酶选自蛋白酶、纤维素酶、蜗牛酶、几丁质酶中的任意一种或至少两种的组合，优选为蛋白酶和纤维素酶的组合；

优选地，步骤(2)所述酶解时酶解液的pH为6-9；

优选地，步骤(2)所述酶解温度为40-70℃；

优选地，步骤(2)所述酶解时酶在发酵液中的体积浓度为0.08～0.20％；

优选地，步骤(2)所述酶解的时间为5～10h。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述活化时使用的培养基为活化培养基；

优选地，步骤(1)所述扩培时使用的培养基为种子培养基；

优选地，步骤(1)所述发酵时使用的培养基为发酵培养基；

优选地，所述活化培养基成分包括10-20g/L碳源、20～40g/L氮源和10～25g/L无机盐；

优选地，所述种子培养基成分包括20～40g/L碳源、20～40g/L氮源和5～20g/L无机盐；

优选地，所述发酵培养基成分包括20～40g/L碳源、15～35g/L氮源和5～20g/L无机盐。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法使用的发酵系统包括：种子罐、发酵罐、酶解罐、分离设备、废料罐、补料罐和收集罐，所述补料罐包括氮源补料罐和碳源补料罐；

所述种子罐、发酵罐、酶解罐和分离设备依次相连，所述收集罐与分离设备相连，所述分离设备、废料罐与发酵罐依次相连，所述氮源补料罐与发酵罐相连，所述碳源补料罐与发酵罐相连。