[发明专利]一种天蚕素抗菌肽的融合表达及其纯化方法

说明书

本发明公开了一种天蚕素抗菌肽的融合表达及其纯化方法，包括三个步骤，分别为天蚕抗菌肽的融合表达；融合表达产物的处理；融合蛋白的纯化。本发明采用自诱导融合表达的方式代替目前常用的IPTG诱导，大大的提高融合蛋白的表达量，因IPTG价格过高，采用自诱导的方式降低成本；采用融合蛋白变性直接上样纯化、洗脱复性的方式纯化目标蛋白，精简纯化步骤缩短了纯化工艺路线，节约时间节约成本；提高了纯化效率和收益，其纯度高于90％时纯化收率大于50％，更加适合于产业化生产，效果更加显著。

技术领域

本发明涉及一种抗菌肽的融合表达及其纯化方法，特别是涉及一种天蚕素抗菌肽的融合表达及其纯化方法。

背景技术

随着抗生素的过度使用甚至滥用，导致了一系列耐药菌的出现，更甚至出现了很多的“超级细菌”，在此背景下，亟需开发出一种新型、高效的抗菌剂来取代或部分取代抗生素。抗菌肽是由宿主产生的能抵御外界微生物侵害、消除体内突变细胞的一类小分子多肽。其化学本质属蛋白质结构在体内被分解成基本单元氨基酸，无残留问题，无免疫原性，基本不产生耐药性。抗菌肽本身不仅具有广谱抗菌杀菌活性，而且还能选择性杀伤部分真菌、病毒、癌细胞等；而且其对正常的哺乳动物细胞未见有明显毒副作用。故抗菌肽成为取代抗生素使用的可能。

天蚕素最早是从惜古比天蚕中发现并分离得到，它被命名为Cecropin，是最早被发现并被分离的抗菌肽。天蚕素是一类碱性耐热短肽，具有广谱的抗菌活性，其广泛存在于大自然中，它在抗菌肽的众多分类中有着非常重要的地位。从天蚕素的发现至今，人们在细菌、真菌、两栖类、昆虫、植物、哺乳动物、人类体内等都发现了抗菌肽，种类超过3400多种，现收录于抗菌肽库http://aps.unmc.edu/AP/中。抗菌肽的生产除了从动植物中提取，还能使用化学合成技术制备，基因工程技术表达。从动植物中提取抗菌肽其工艺复杂，提纯难道较大，产量低、生产成本高；化学合成抗菌肽也存在工艺复杂、活性差、成本高等缺点，只能在实验室进行研究，而不适宜工业化生产；基因工程技术表达抗菌肽，其具有高表达、高活性等特点成为抗菌肽生产研究的热点。大肠杆菌表达系统是基因工程表达技术中应用较早、最广泛的系统之一，其具有遗传背景清楚、目的蛋白表达量高、周期较短、成本低等优势，在基因表达技术中有很着极为重要的地位。本发明主要是利用大肠杆菌E.coli融合表达天蚕素抗菌肽，通过研究找到了一种能提高其表达量，降低成本的方法，为工业化生产奠定了基础。

发明内容

本发明的目的就是提供一种天蚕素抗菌肽的融合表达及其纯化方法，能完全解决上述现有技术的不足之处。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

一种天蚕素抗菌肽的融合表达方法，包括如下方法：

1)配制培养基配方：

①配制1％ZY溶液100ml：称取2g胰蛋白胨、1g酵母提取物加ddH₂O溶解并定容至100ml；

②配制50×M溶液100ml：秤取NH₄Cl 13.4g、Na₂SO₄ 3.55g、Na₂HPO₄ 17.75g、KH₂PO₄17g加ddH₂O溶解调节PH至6.7，并定容至100ml，然后做灭菌处理后保存，保存温度4℃；

③配制50×5052溶液100ml：称取甘油25g、葡萄糖2.5g、乳糖10g加ddH₂O溶解并定容至100ml，灭菌，4℃保存；