[发明专利]一种灵芝孢子的保存和激活方法

说明书

本发明提供一种灵芝孢子的保存和激活方法，具体涉及食用菌育种技术领域。本发明采用去活液将刚刚采集的灵芝孢子进行液氮冷冻和去活，然后加入改良液体石蜡中冷藏，能够保存3‑5年，并采用微波和活化液进行活化，使孢子复苏，能够实现高萌发率。本发明方法简单易操作、工艺可控，可适用于灵芝孢子育种研究中孢子的保存和促进萌发。

【技术领域】

本发明涉及食用菌育种技术领域，具体涉及一种灵芝孢子的保存和激活方法。

【背景技术】

灵芝在中国向来被视为草木菁英，有“瑞草”、“仙草”等美誉，在日本被称为万年茸，是一种珍贵的药(食)用菌。《神农本草经》指出：赤芝(即灵芝)“苦，平，无毒”，主治“胸中结、益心气，补中、增智慧、不忘”，“久食轻身不老，延年神仙”。《本草纲目》记载灵芝有“滋补强壮、延年益寿、利关节、治耳聋”等神奇功效，将其列为药中上品。

正是由于灵芝的神奇功效，以及国家和地方法规没有关于野生灵芝资源保护、恢复、发展及利用等相关规定，人们缺乏法律意识和野生资源保护意识。且近年来，野生灵芝的价格又节节攀升，受利益驱使人们对野生灵芝不管成熟与否都进行采挖，这种掠夺性的采集，对野生灵芝资源造成了严重的破坏，致使一些具有珍贵药用价值的野生灵芝种源濒临灭绝。因而，近年来受市场驱动，也有大力发展灵芝人工栽培育种的趋势，发展出了杂交、原生质体融合、诱变等技术手段。但目前研究表明，灵芝生产上使用的菌种间遗传多样性并不高，而以此亲本材料通过杂交或诱变或原生质体融合等手段获得的杂交菌株或诱变菌株或融合菌株中出现超亲现象的概率很低，无法获得具有优良性状的变异个体，致使难以获得与野生灵芝品质相当的超越亲代的优良菌株。在自然生长环境中，灵芝是通过孢子进行减数分裂生成单核生殖细胞的有性生殖菌类，不同交配型的单核生殖细胞融合后获得的后代在减数分裂和融合的过程中，能够产生丰富的遗传多样性，有利于优良个体的生成和繁衍，但是自然条件下灵芝孢子的萌发极低。虽然近年来也有利用灵芝孢子进行育种的研究，但其仍然没有摆脱萌发率低的难题，且对于孢子作为育种来源的保存也受到限制，在当前的研究中还无法做到将灵芝孢子长期保存下来用于新品种的培育筛选，哪怕是只经过避光存放一天的灵芝孢子都会无法萌发，因此只能即采即用，这极大阻碍了进一步利用灵芝孢子进行的育种研究。

综上所述，为了能够高效运用灵芝孢子进行新品种的培育与筛选，也为了能够长期保留优良品性灵芝品种的孢子，有必要开发一种灵芝孢子的保存和激活方法。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对灵芝孢子萌发率低、不易保存的问题，提供一种灵芝孢子的保存和激活方法。本发明采用去活液将刚刚采集的灵芝孢子进行液氮冷冻和去活，然后加入改良液体石蜡中冷藏，能够保存3-5年，并采用微波和活化液进行活化，使孢子复苏，能够实现高萌发率。本发明方法简单易操作、工艺可控，可适用于灵芝孢子育种研究中孢子的保存和促进萌发。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种灵芝孢子的保存和激活方法,包括以下步骤：

a.取刚刚从灵芝子实体收集到的孢子，立即浸泡于液氮中10-30秒，然后取出，再浸泡于-40～-20℃的去活液中120-220秒，得去活孢子；

b.取去活孢子加入与去活液相同温度的改良液体石蜡中进行密封，得封存体，然后将封存体置于保存温度为2-10℃的冰箱中即可保存3-5年；

c.取步骤b中保存于冰箱中的封存体，开封后从改良液体石蜡中取出去活孢子，然后用滤纸吸干表面的改良液体石蜡，置于功率密度为1-9mW/cm²的微波下照射6-12分钟，照射期间的温度与步骤b中冰箱的保存温度相同，得初级活化孢子；

d.取初级活化孢子，喷洒活化液后在10-20℃下静置活化10-30分钟，得终极活化孢子；所述终极活化孢子无需消毒便可直接用于接种培养。