[发明专利]一种磁性固定化脂肪酶及其在拆分1-甲基-3-苯丙胺中的应用

权利要求书

1.一种磁性固定化脂肪酶，其特征在于所述磁性固定化脂肪酶是以3-氨基丙基三乙氧基硅烷和CS₂改性的Fe₃O₄磁性纳米颗粒为载体，加入待固定脂肪酶，在pH＝7.0、0.1mol/L的磷酸缓冲液中，35℃超声摇床固定制备而成；所述载体按如下方法制备：(1)APTES-Fe₃O₄磁性纳米颗粒：取干燥的Fe₃O₄磁性纳米颗粒，分散在甲苯中并在超声波频率为40KHz下超声分散，然后向混合物中加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷，然后放到30℃振荡器中振荡过夜，通过外部磁场收集沉淀，并用乙醇和去离子水冲洗以除去过量有机硅烷试剂，水洗8次之后，将黑色沉淀物转移到防爆黑盖小瓶中，然后放入-80℃冷冻7h，再-65℃冷冻干燥12h，最终获得APTES-Fe₃O₄磁性纳米颗粒；所述甲苯体积用量以Fe₃O₄磁性纳米颗粒重量计为100mL/g；所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷体积用量以Fe₃O₄磁性纳米颗粒重量计为2mL/g；

(2)磁性纳米颗粒APTES-Fe₃O₄-CS₂：称取APTES-Fe₃O₄磁性纳米颗粒，分散在CH₃OH中，在频率为40KHz下超声处理10min，然后加入CS₂并在室温搅拌12h，通过外部磁场收集沉淀，然后用乙醇和去离子水洗涤数次后转移到防爆黑盖小瓶中，然后在-80℃冰箱冷冻7h，最后-65℃冷冻干燥12h，获最终产物磁性纳米颗粒APTES-Fe₃O₄-CS₂；所述CH₃OH体积用量以APTES-Fe₃O₄磁性纳米颗粒重量计为100mL/g；所述CS₂体积用量以APTES-Fe₃O₄磁性纳米颗粒重量计为11mL/g。

2.如权利要求1所述磁性固定化脂肪酶，其特征在于Fe₃O₄磁性纳米颗粒按如下方法制备：

将FeSO₄·7H₂O和FeCl₃·6H₂O分别溶解于蒸馏水中，混合后加入去离子水a，在1000r/min、40℃条件下高速搅拌，同时缓慢加入质量浓度25-28％氨水，当溶液变得黑亮且上清液的pH≥10.0时，调节温度为60℃，继续搅拌30min，然后再调节温度为70℃，搅拌1h，反应结束后，用无水乙醇和去离子水反复清洗10次至上清液为中性，磁铁回收，沉淀在超低温-80℃冰箱冷冻7h，然后-65℃冷冻干燥12h，获得Fe₃O₄磁性纳米颗粒；所述FeCl₃·6H₂O与FeSO₄·7H₂O质量比为1:0.56；所述蒸馏水体积用量以FeCl₃·6H₂O重量计为4mL/g；所述去离子水a体积用量以FeCl₃·6H₂O重量计为15mL/g；所述氨水体积用量以FeCl₃·6H₂O重量计为4mL/g。

3.如权利要求1所述磁性固定化脂肪酶，其特征在于所述磁性固定化脂肪酶按如下方法制备：

称取脂肪酶，分散在pH＝7.0、0.1mol/L的磷酸缓冲液中，频率为40KHz下超声10min，加入APTES-Fe₃O₄-CS₂磁性纳米颗粒，放入35℃摇床固定4h，经外加磁铁分离，沉淀水洗，得到磁性固定化脂肪酶；所述缓冲液体积用量以脂肪酶重量计为400mL/g；所述APTES-Fe₃O₄-CS₂磁性纳米颗粒与脂肪酶重量比为1.5:1。