[发明专利]一种化学发光液的应用方法

说明书

本发明公开了一种化学发光液的应用方法，包括如下步骤：十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳操作和电转膜操作，将转印好的膜从转膜装置上取下来，利用封闭膜上的非特异结合位点，置于摇床上在室温下震荡封闭1小时或在2‑8摄氏度温度下震荡封闭8小时；用ECL工作液充分覆盖膜后在室温下孵育1分钟；吸弃多余的ECL工作液，将膜置于两层保鲜膜之间，赶走膜与保鲜膜之间的气泡；将膜片吸附蛋白的面朝上置于暗盒中，在暗室中，取出胶片覆于膜表面后进行曝光操作或使用成像系统对所述膜片进行扫描成像。本实施例所提供的化学发光液的应用方法，可用于实现实验中检测辣根过氧化物酶标记的探针或者抗体。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种化学发光液的应用方法。

背景技术

目前，临床检验用体外诊断检测试剂领域应用的最为广泛的检测方法，主要是化学发光免疫分析法。化学发光免疫分析法是临床免疫检验技术发展的较高诊断技术，它可以进行定量检测，与放射性免疫分析法和酶联免疫分析法相比，具有放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的所有优点，同时克服了放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的缺点。其中化学发光免疫分析法所用到的化学发光底物液是最重要的试剂，是限制化学发光检测的关键物质。化学发光底物液的灵敏度、发光值测定范围以及稳定性等显著影响化学发光免疫分析检测。现有技术中的化学发光液及其应用方法，工作液混合后10分钟之内使用，超出该时间后发光值和发光梯度就严重下降，导致检测范围变窄，线性变差，灵敏度降低，不能满足检测需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种化学发光液的应用方法，包括如下步骤：S1十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳操作和电转膜操作，将转印好的膜从转膜装置上取下来，利用封闭膜上的非特异结合位点，置于摇床上在室温下震荡封闭1小时或在2-8摄氏度温度下震荡封闭8小时；S2去除闭液，加入一抗工作液，室温下摇晃孵育1小时或2-8摄氏度温度下静置孵育8小时；S3用洗膜缓冲液在摇床上震荡漂洗膜4-6次，每次至少5分钟，洗掉一抗工作液；S4加入标记辣根过氧化物酶的二抗工作液，在室温下摇晃孵育1小时；S5用洗膜缓冲液在摇床上震荡漂洗膜4-6次，每次至少5分钟，洗掉二抗工作液；S6用ECL工作液充分覆盖膜后在室温下孵育1分钟；S7吸弃多余的ECL工作液，将膜置于两层保鲜膜之间，赶走膜与保鲜膜之间的气泡；S8将膜片吸附蛋白的面朝上置于暗盒中，在暗室中，取出胶片覆于膜表面后进行曝光操作或使用成像系统对所述膜片进行扫描成像。

所述曝光操作包括如下步骤：S81按照1分钟的时间进行第一次曝光操作的步骤；S82根据第一次曝光操作的结果评估出第二次曝光时间；S83按照评估出的第二次曝光时间进行第二次曝光。

所述将膜片吸附蛋白的面朝上置于暗盒中，在暗室中，取出胶片覆于膜表面后进行曝光操作或使用成像系统对所述膜片进行扫描成像的步骤在孵育完成后30分钟内完成。所述S1中所述的电转膜操作，采用转印膜来完成，所述转印膜为聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。在所述S1中所述的电转膜操作之前，应包括聚偏二氟乙烯膜预处理步骤，具体包括：用甲醇湿润聚偏二氟乙烯膜；待甲醇湿润聚偏二氟乙烯膜变为半透明状后用纯水或转印缓冲液湿润。所述S3用洗膜缓冲液在摇床上震荡漂洗膜4-6次，每次至少5分钟，洗掉一抗工作液中所述的洗掉一抗工作液的步骤，所采用的洗涤液为含0.05％的Tween-20的叔丁基二甲基硅基或含0.05％的Tween-20的硫化铅。所述S1完成SDS-PAGE操作和电转膜操作，将转印好的膜从转膜装置上取下来，利用封闭膜上的非特异结合位点，置于摇床上在室温下震荡封闭1小时或在2-8摄氏度温度下震荡封闭8小时的步骤中，所采用的封闭液为含5％脱脂奶粉的TBST或PBST。所述一抗工作液为用所述封闭液稀释至10ng/mL至1ug/mL的第一抗体工作液。所述二抗工作液为用所述封闭液稀释至2ng/mL至100ng/m的辣根过氧化物酶标记的第二抗体工作液。本实施例所提供的化学发光液的应用方法，还包括在完成十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳操作和电转膜操作前24小时内完成ECL工作液预配置步骤。