[发明专利]一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法

说明书

本发明提供了一种应用液质联用技术(HPLC‑MS/MS)对人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。该方法提高了提取回收率、减少了基质效应、增强了选择性，减少对分析物和内标定量分析的干扰以及改善了检测灵敏度。

技术领域

本发明属于生物分析领域，更具体地，涉及一种应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)对人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。

背景技术

艾司西酞普兰作为一个新型抗抑郁药，能有效地改善患者的疗效，艾司西酞普兰花费的卫生成本低，心血管系统及肝功能方面不良反应发生率低，疗效好而不良反应少。

仿制药一致性评价中，如何确定更好更稳定的进行生物等效性评价，药物的检测分析显得非常重要。艾司西酞普兰生物样品的成分复杂、基体干扰大，同时样品较难获得而且量少，被分析物的浓度通常很低，因此对生物样品分离分析技术提出的要求越来越高，亟需建立一种高灵敏度、高选择性的艾司西酞普兰含量分析方法。

发明内容

本发明针对上述现有技术中的不足，从样品前处理和检测技术两方面着手，提供了一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，包括如下步骤：

(1)标准工作溶液的配制：称取艾司西酞普兰对照品于棕色容量瓶，加入甲醇溶液配制成浓度为50.00～500.0μg·mL^-1的艾司西酞普兰储备液，将所述艾司西酞普兰储备液用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成浓度为2.000～500.0ng·mL^-1的艾司西酞普兰标准曲线工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为2.000～400.0ng·mL^-1的艾司西酞普兰质控工作溶液；称取一定量的内标艾司西酞普兰-d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为10.00～50.00μg·mL^-1的内标储备液，用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成100.0ng·mL^-1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0～10℃下保存，备用；

取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰标准曲线工作溶液，混匀，配置成相应梯度的标准曲线，其浓度范围为0.2000～50.00ng·mL^-1；取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰质控工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.2000～40.00ng·mL^-1；

(2)样品处理：取等体积的标准曲线、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往标准曲线、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入甲醇，混匀，离心，转移上清液至96孔板中，将各提取物保存；

(3)标准曲线制作：将步骤(2)得到标准曲线、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以艾司西酞普兰和内标艾司西酞普兰-d4的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中艾司西酞普兰的浓度为横坐标制作标准曲线；

(4)定量分析：将试验样品按照步骤(3)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中艾司西酞普兰的浓度。

艾司西酞普兰的结构式如下：

优选地，步骤(3)中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为：

a.色谱条件：色谱柱为Luna Omega Polar C18；流动相A：含0.1％甲酸和5mM甲酸铵的水溶液；流动相B：甲醇；柱温箱温度：40℃；流速：0.3mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：28.0～32.0MPa；洗脱方式为梯度洗脱；