[发明专利]一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法

权利要求书

1.一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)标准工作溶液的配制：称取艾司西酞普兰对照品于棕色容量瓶，加入甲醇溶液配制成浓度为50.00～500.0μg·mL^-1的艾司西酞普兰储备液，将所述艾司西酞普兰储备液用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成浓度为2.000～500.0ng·mL^-1的艾司西酞普兰标准曲线工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为2.000～400.0ng·mL^-1的艾司西酞普兰质控工作溶液；称取一定量的内标艾司西酞普兰-d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为10.00～50.00μg·mL^-1的内标储备液，用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成100.0ng·mL^-1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0～10℃下保存，备用；

取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰标准曲线工作溶液，混匀，配置成相应梯度的标准曲线，其浓度范围为0.2000～50.00ng·mL^-1；取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰质控工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.2000～40.00ng·mL^-1；

(2)样品处理：取等体积的标准曲线、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往标准曲线、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入甲醇，混匀，离心，转移上清液至96孔板中，将各提取物保存；

(3)标准曲线制作：将步骤(2)得到标准曲线、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以艾司西酞普兰和内标艾司西酞普兰-d4的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中艾司西酞普兰的浓度为横坐标制作标准曲线；

(4)定量分析：将试验样品按照步骤(3)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中艾司西酞普兰的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，步骤(3)中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为：

a.色谱条件：色谱柱为Luna Omega Polar C18；流动相A：含0.1％甲酸和5mM甲酸铵的水溶液；流动相B：甲醇；柱温箱温度：40℃；流速：0.3mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：28.0～32.0MPa；洗脱方式为梯度洗脱；

b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：3000V；涡旋离子喷雾温度：650℃；气帘气种类：35psi；雾化气种类Gas1：45psi；辅助气Gas 2：60psi；数据收集时间：3.6min。

3.根据权利要求1所述的一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于：步骤(1)中所述艾司西酞普兰储备液的浓度为50.00～500.0μg·mL^-1，所述内标储备液的浓度为10.00～50.00μg·mL^-1，所述艾司西酞普兰工作溶液的梯度浓度分别为2.000、10.00、20.00、80.00、200.0、300.0、500.0ng·mL^-1，所述艾司西酞普兰质控工作溶液的浓度梯度为2.000、5.000、100.0、400.0ng·mL^-1，所述内标工作溶液的浓度为100ng·mL^-1。

4.根据权利要求1所述的一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，步骤(1)所述质控样品的梯度浓度分别为0.2000、0.5000、10.00、40.00ng·mL^-1，所述质控样品于-15～-90℃储存；所述标准曲线的梯度浓度分别为0.1000、1.000、2.000、8.000、20.00、30.00、50.00ng·mL^-1，所述标准曲线为新鲜配制。

5.根据权利要求1所述的一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的条件为以17000×g的速度离心15min。