[发明专利]一种分离胎盘源造血干细胞的方法

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种分离造血干细胞的方法，具体涉及一种分离胎盘源造血干细胞的方法。本法从胎盘组织中分离得到造血干细胞，首先将胎盘组织切碎并进行冲洗过滤，然后再对组织块进行动员处理，从组织块中分离出位于血管内壁的造血干细胞。本法大大提高了胎盘源的造血干细胞的分离提取率，并缩短了制备时间，获得的造血干细胞具有较高的生物活性。本方案获得的造血干细胞可以用于取代骨髓、动员后外周血和脐带血造血干细胞用于血液疾病等的治疗中。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种分离造血干细胞的方法，具体涉及一种分离胎盘源造血干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)是存在于造血组织中的一群原始造血细胞，造血干细胞可定向分化、增殖为不同的血细胞系，并进一步生成血细胞。造血干细胞的来源主要有四个方面：骨髓造血干细胞、外周血造血干细胞、脐带血造血干细胞、胎盘组织造血干细胞。胎盘组织中造血干细胞的含量大，利用胎盘造血干细胞进行造血干细胞移植能有效解决骨髓造血干细胞等干细胞的来源不足的问题，将有望取代骨髓、动员后外周血和脐带血造血干细胞用于血液疾病等的治疗中。

现有技术中大多采用灌洗的方法从胎盘组织中获取胎盘干细胞，一般的操作流程为，取离体的胎盘组织，从脐动脉处灌入灌洗液，然后在脐静脉处收集含有造血干细胞的灌洗液。但是现有技术的操作方法存在以下的问题：在灌洗过程中很容易出现胎盘组织中的血管栓塞和堵塞的现象，可能会造成整个灌洗过程不能顺利进行，导致了不能从脐静脉处充分收集胎盘组织中的干细胞，现有技术中可通过在灌洗液中加入一定量的抗凝剂解决堵塞问题，但抗凝剂的加入会影响造血干细胞状态；另外，在胎盘组织中的造血干细胞部分位于血液中，很大一部分造血干细胞都附着于血管内皮，用灌洗的手段很难将附着于血管内皮的造血干细胞完全冲洗下来。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离胎盘源造血干细胞的方法，本方法可以从胎盘组织中分离获得大量的造血干细胞。

为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：

一种分离胎盘源造血干细胞的方法，包括以下步骤：

S1预处理步骤：将胎盘组织剪碎成组织块Ⅰ；用生理盐水冲洗组织块Ⅰ，收集滤液Ⅰ和组织块Ⅱ；

S2组织动员步骤：使用动员液对组织块Ⅱ进行动员处理，得组织块Ⅲ；所述动员液的成分包括AMD3100和基础培养基；

S3细胞收集步骤：用生理盐水冲洗组织块Ⅲ，收集滤液Ⅱ；对滤液Ⅱ进行过滤和离心处理，收集下层细胞Ⅱ。

采用上述技术方案，技术原理如下：将胎盘组织清洗剪碎之后，通过冲洗过滤(是指把待处理的组织置于滤网上，同时使用生理盐水(通常使用含有1％双抗的生理盐水)等液体冲洗该组织，将该组织中的粒径较小的物质冲洗到收集容器中)，可以获得含有造血干细胞的滤液Ⅰ，且组织块Ⅱ中还含有大量的附着在血管内皮上的造血干细胞。使用动员液(含有动员剂AMD3100)处理组织块Ⅱ，获得组织块Ⅲ(即为动员后的胎盘组织)。然后再对组织块Ⅲ进行冲洗过滤，收集滤液Ⅱ，对集滤液Ⅱ进行过滤和离心处理获得下层细胞Ⅱ(其中含有大量造血干细胞)。其中，AMD3100是一种CXCR4趋化因子受体拮抗剂，可以与造血干细胞上的CXCR4可逆性结合，干扰CXCR4与其配体的结合，阻断CXCR4参与的生理过程，将造血干细胞动员出来。

有益效果：