[发明专利]一种分离胎盘源造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种分离胎盘源造血干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1预处理步骤：将胎盘组织剪碎成组织块Ⅰ；用生理盐水冲洗组织块Ⅰ，收集滤液Ⅰ和组织块Ⅱ；

S2组织动员步骤：使用动员液对组织块Ⅱ进行动员处理，得组织块Ⅲ；所述动员液的成分包括AMD3100、基础培养基、Ⅰ型胶原酶和胎牛血清；胎牛血清和基础培养基的体积比为（4-6）:100；AMD3100和所述组织块Ⅱ的用量比（8-12）mg:1kg；Ⅰ型胶原酶在动员液中的浓度为0.2-0.5mg/ml；对组织块Ⅱ进行动员处理的温度为37-39℃，动员处理的时长为30-90min；

S3细胞收集步骤：用生理盐水冲洗组织块Ⅲ，收集滤液Ⅱ；对滤液Ⅱ进行过滤和离心处理，收集下层细胞Ⅱ；对滤液Ⅰ进行过滤和离心处理，收集下层细胞Ⅰ；将下层细胞Ⅰ和下层细胞Ⅱ合并，获得合并细胞；

S4除红细胞步骤：将S3中的合并细胞用生理盐水重悬，然后离心弃上清液，再加入羟乙基淀粉溶液，获得分离体系Ⅰ；对分离体系Ⅰ进行离心处理，并去除红细胞层，获得分离体系Ⅱ；对分离体系Ⅱ进行离心处理，并去除血浆层，得有核细胞悬液；

S5细胞冻存步骤：将S4中的有核细胞悬液混匀后放入冻存袋，并在冻存袋中加入冻存液，将冻存袋封口后置于4℃冰箱暂存，利用程序降温仪降温至-80℃；然后将冻存袋置于-80℃冰箱中暂存；待检测合格后，最后将然后将冻存袋置于液氮罐中长期储存；

清洗胎盘组织的方法为：使用含有双抗的生理盐水冲洗胎盘组织5-8次；组织块Ⅰ的体积为0.1-1mm³。

2.根据权利要求1所述的一种分离胎盘源造血干细胞的方法，其特征在于，在S1中，在剪碎胎盘组织之前，去除胎盘表面的羊膜组织，使用75%酒精溶液冲洗胎盘表面，并清洗胎盘组织。