[发明专利]大网膜脱细胞基质材料的制备方法及软骨组织的构建方法

说明书

本发明提供了一种大网膜脱细胞基质材料的制备方法及软骨组织的构建方法。制备方法包括步骤：对大网膜进行清洗，进行冻融循环处理得到第一中间物，将第一中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第一预定时长得到第二中间物，对第二中间物进行脱脂处理，然后清洗得到第三中间物，将第三中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第二预定时长得到第四中间物，对第四中间物进行脱组织细胞处理，然后清洗得到第五中间物，将第五中间物进行干燥和灭菌处理，得到大网膜脱细胞基质材料。本申请提供的制备方法制备的大网膜脱细胞基质材料尤其适用于软骨组织的再生培养。

技术领域

本发明涉及组织工程技术领域，具体涉及一种大网膜脱细胞基质材料的制备方法及软骨组织的构建方法。

背景技术

创伤、骨性关节炎等均为临床上常见的骨科疾病，这种疾病发病率较高，诱因也相对较多，且多数患者损伤后伴有软骨下骨的缺损，缺损如果得不到及时有效的修复，将会诱发其他疾病，严重者甚至导致关节功能的丧失。目前，临床上对于骨关节软骨缺损尚缺乏理想的修复方法，常用的修复方法尚存在一定的局限性，传统的软骨损伤治疗方法有关节磨削成形术、钻孔、微骨折及关节镜灌洗术，这些方法均不能将损坏的软骨及软骨下骨质修复成它们原来所具有的正常的组织结构。

大网膜是腹膜的一种。腹膜是存在高等脊椎动物腹腔中的一层黏膜，主要由间皮细胞构成，借由结缔组织的支持所形成的膜状组织。腹膜包覆大部分腹腔内的器官，能分泌黏液润湿脏器的表面，减轻脏器间的摩擦。腹膜从壁层向脏层移行，或从一器官移行于另一器官，构成双层的结构。两层腹膜间常有血管、神经和淋巴管走行。这些形成物依其本身结构特点和特定脏器联系而分别命名为韧带、网膜和系膜。大网膜是连接胃大弯至横结肠的腹膜，共四层：包括胃前、后壁的腹膜在胃大弯处愈合，形成大网膜的前两层，向下延伸至脐平面稍下方，然后向后上折返，包被横结肠，形成大网膜的后两层。大网膜是很薄的组织，富有极强的弹性和灵活性，同时具有高度血管化的结构，这些特点使其成为组织工程和再生医学领域中优良的天然生物材料。

目前，在组织工程研究领域，大网膜可作为体外移植构建物的“天然生物反应器”，促进构建物血管化的形成，增强移植构建物的功能，已成功应用于心肌组织工程、神经组织工程等领域。然而，目前尚未见将大网膜脱细胞基质应用于软骨组织工程的研究报道。

发明内容

基于上述现状，本发明的主要目的在于提供一种大网膜脱细胞基质材料的制备方法及软骨组织的构建方法，以解决现有大网膜脱细胞基质材料存在的上述问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一方面提供了一种大网膜脱细胞基质材料的制备方法，所述制备方法包括步骤：

S100、对大网膜进行清洗；

S200、对清洗后的大网膜进行冻融循环处理得到第一中间物；

S300、将所述第一中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第一预定时长得到第二中间物，PH值例如可以为7.8、7.9、8、8.1、8.2，进一步优选为8；

S400、对所述第二中间物进行脱脂处理，然后清洗得到第三中间物；

S500、将所述第三中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第二预定时长得到第四中间物，PH值例如可以为7.8、7.9、8、8.1、8.2，进一步优选为8；

S600、对所述第四中间物进行脱组织细胞处理，然后清洗得到第五中间物；

S700、将所述第五中间物进行干燥和灭菌处理，得到所述大网膜脱细胞基质材料。