[发明专利]一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒及其制备方法，该技术方案以其特点在于，运用组合型偶联剂，将Ⅳ型胶原蛋白抗体交联于羧基胶乳微球上，形成Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒，实现抗体与胶乳微球的高效偶联。在37℃恒温，波长为600nm下，测定吸光度，计算出样品IV型胶原蛋白含量。与传统偶联方法相比，本试剂盒抗体利用率高，精密度高，能有效控制批间差，值得进一步推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检测及体外诊断领域，具体涉及一种IV型胶原(IVC)的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

IV型胶原蛋白(IVC)属于非原纤维胶原蛋白，是基底膜网状结构的主要成分之一，不但在BMs骨架形成过程中起重要作用，而且还具有参与细胞黏附、迁移、生长、增殖和分化等重要生理过程的功能，因此，IV型胶原蛋白(IVC)的生物学特性与肿瘤、肾病等多种重大疾病密切相关。

作为肝细胞基底膜的核心结构，在肝纤维化形成过程中起主要作用。Ⅳ型胶原蛋白在肝纤维化时有显著变化，在轻度肝损伤合并肝纤维化内胶原总量增加尚不明显时，血清Ⅳ型胶原蛋白含量即可明显增加，其含量的变化能较好的反应肝纤维化、肝细胞损伤及程度。

目前市场上IV型胶原蛋白(IVC)检测技术常用的方法有如下几种：酶联免疫检测法(ELISA)、放射免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析方法、胶乳免疫比浊法、化学发光法等。其中酶联免疫检测法(ELISA)需要特定设备，耗时；放射免疫分析技术法需要搭配昂贵的设备，存在放射线辐射和污染等问题；时间分辨荧光免疫分析方法需要用稀有金属进行标记；化学发光法需要特定设备，且仅能一次发光且易受环境干扰。胶乳免疫比浊法属于普通免疫比浊技术的衍生技术，克服了普通免疫比浊技术信号量非常有限的缺点，使抗体体积有了数量级上的增长，大幅提升了可检测性，但该方法也存在技术难点，即抗体与胶乳微球的偶联效率无法保证，易出现偶联不上、偶联速度慢及后期脱落等情况，使得其活性及稳定性不能保证。

大部分的抗体与胶乳微球偶联所使用的偶联剂以碳二亚胺(EDC)为主，合成反应活性、偶联效率、和偶联的稳定性不能得到保证，因此，找到一种抗体与胶乳微球间高效偶联的偶联剂，是本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

为解决现有技术存在的问题和不足，本发明的目的是提供一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒，该试剂盒中运用组合型偶联剂，将Ⅳ型胶原蛋白抗体交联于羧基胶乳微球上，形成Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒，实现抗体与胶乳微球的高效偶联。

为实现上述目的，本发明的技术方案是提供一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒，包括有试剂R1和试剂R2，所述的试剂1与试剂2的体积比为3:1；

所述的试剂R1包括以下组分：

pH6.0-6.5的醋酸盐缓冲液               50mmol/L

牛血清白蛋白                          0.9g/L

叠氮钠                                0.01％

所述的试剂R2包括以下组分：

所述的Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒为通过组合型偶联剂，将Ⅳ型胶原蛋白抗体交联于羧基胶乳微球上，形成Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒；

所述的组合型偶联剂包括有以下组分：

碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐三者质量比为1.2﹕1.2﹕1。

另外，本发明还提供一种检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒的制备，包括以下子步骤