[发明专利]hnRNPC蛋白的S260位点磷酸化作为结直肠癌干性标记物的应用

说明书

本发明公开了hnRNPC蛋白的S260位点磷酸化作为结直肠癌干性标记物的应用。本发明的磷酸化质谱定量结果显示，hnRNPC的Ser260位点所对应的磷酸化肽段在CRC干性特征细胞中上调17.6倍，免疫印迹实验也证实该磷酸化在CRC干性特征细胞中表达上调具有普遍性，并通过体内和体外实验证实过表达hnRNPC能够促进CRC干性，而将hnRNPC的260位丝氨酸突变为丙氨酸后则无法促进干性。因此，hnRNPC蛋白的S260位点磷酸可以作为肿瘤尤其是结直肠癌干性的标记物，为临床肿瘤检测、以及靶向药物设计提供了坚实的理论依据。

技术领域

本发明涉及磷酸化蛋白质科学技术领域，特别涉及hnRNPC蛋白的S260位点磷酸化作为结直肠癌干性标记物的应用。

背景技术

目前结肠癌(CRC)仍是严重威胁人类生命的恶性肿瘤之一^[1]。越来越多证据表明肿瘤干细胞(CSCs)的存在是肿瘤发展与复发的根源^[2]。CSCs是一群拥有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞，它们与胚胎干细胞有很多共性，在维持肿瘤发生与发展，促进肿瘤对化疗与放疗耐受中都发挥重要作用^[3,4]。CSC理论认为，在肿瘤中只有CSCs具有自我复制的能力，与普通肿瘤细胞相比，CSCs往往能躲过放疗和化疗等传统肿瘤治疗手段，转移到合适的转移灶，分化出肿瘤细胞以及各种肿瘤相关细胞形成转移瘤^[5]，CSCs的存在是CRC发生发展的根源。然而肿瘤干性的调控非常复杂，目前针对肿瘤干性的诊断和治疗并不理想，其中重要的原因是许多肿瘤干性调控因子尚未被发现。

磷酸化是细胞内最重要的可逆蛋白质翻译后修饰之一，通过激酶将ATP的磷酸基团转移到底物蛋白质的特定位点(丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)上，磷酸化酶去除修饰的磷酸基团而完成可逆的修饰调控^[6]。蛋白质磷酸化与去磷酸化过程参与调控胞内许多网络的信号转导，包括调节细胞增殖、发育、分化、凋亡及新陈代谢等过程^[7,8]。此外，有研究表明蛋白质磷酸化水平的动态变化，对于调控肿瘤干性的信号网络至关重要^[9,10]。由于细胞中磷酸化调控所涉及的生物过程错综复杂，因此，利用蛋白质组学可以从整体上观察细胞中蛋白磷酸化修饰的状态及其定量变化。

蛋白质组学，能够实现全蛋白质与蛋白质翻译后修饰的差异检测，越来越多的肿瘤相关候选标志物被发现，成为探寻肿瘤诊断和治疗的重要突破口，也是发现翻译后修饰位点的重要手段。DIA(Data Independent Acquision)是近几年来迅速发展起来的一种新的数据非依赖型质谱数据采集模式，将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口，高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测，因此可以无遗漏地获得样本中所有离子的全部碎片信息，数据利用度大大提高，缺失值较少^[11]。作为一种非标记的蛋白质定量方法，具有选择性好，定量准确，重复性高等优点^[12]。