[发明专利]一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的双抗夹心酶联免疫检测试剂盒及其制备方法与应用，属于免疫学技术领域和食品安全分析技术领域。该酶联免疫试剂盒含有包被有捕获抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测抗体、鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液。所述捕获抗体由保藏编号为CCTCC NO:C202003的杂交瘤细胞株skTnI‑3E7分泌得到，所述检测抗体为抗鸡骨骼肌肌钙蛋白I多克隆抗体。该酶联免疫试剂盒具有灵敏度、精密度、准确度高，交叉反应率低，适合大批量样品检测等优点。

技术领域

本发明涉及一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用，属于免疫学技术领域和食品安全分析技术领域。

背景技术

在肉类食品中，由于价格、宗教、健康等原因，许多国家制定法规要求食品标签真实明确地标出肉类来源，禁止掺假行为，以保护消费者的利益，但是市场上混淆肉类品种的现象仍然非常普遍，掺假的方式包括掺兑、混入、抽取、假冒等手段，尤其以牛、羊肉制品的掺杂、掺假的行为最为常见，这些掺假行为极大地损害了消费者的利益。在肉类食品中，由于价格、宗教、健康等原因，许多国家制定法规要求食品标签真实明确地标出肉类来源，禁止掺假行为，以保护消费者的利益，但是市场上混淆肉类品种的现象仍然非常普遍，掺假的方式包括掺兑、混入、抽取、假冒等手段，尤其以牛、羊肉制品的掺杂、掺假的行为最为常见，这些掺假行为极大地损害了消费者的利益。鸭、鸡等禽类因饲养周期短、价格低，同时，鸭肉与牛羊肉的纹理高度相似，将大量鸭肉和少量牛羊脂肪、下脚料混合，加工处理后能够达到“以假乱真”的程度，因此，常将鸭肉作为牛羊肉制假的原材料。这种掺假行为损害了消费者的利益，扰乱了市场规则。因此，建立鸭肉源成分的快速鉴别方法至关重要。

目前，国内外许多实验室都使用分子生物学技术手段检测肉制品中的源性成分，DNA检测方法手段多样，主要为核酸探针杂交、DNA指纹分析、PCR特异扩增、PCR-RFLP等。这些方法具有一定的灵敏度，但同时也存在着成本高、对检测对象要求高、工作量大、不能现场检测等缺点，尤其是对于熟肉制品检测有很大不确定性，因为熟肉制品在处理过程会导致基因物质不同水平降解。因此，需要其他的方法来与他它的检测结果相互印证。免疫学方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、操作方便等特点，适于大批量样品筛选，其中酶联免疫吸附法和胶体金试纸条是最常用的方法。

熟肉制品一般都要经过高温、高压处理，在这个过程中许多蛋白都发生了变性，失去了抗原性和水溶性，这就给免疫学方法的建立带来了困难。要想将免疫学法应用于动物源性成分的检测，必须找到一个特异性的热稳定的蛋白质作为标志物抗原，然后研制出针对此抗原的特异性的单克隆抗体。动物骨骼肌中的肌钙蛋白I(TnI)具有种属专一性，可以作为一种耐热种类标志蛋白，区分不同种属生、熟肉制品的肉种类来源。以鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I为目标检测物，能实现鸡或鸭肉源性成分免疫学检测鉴别技术的建立。因此，鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I酶联免疫检测试剂盒的制备对于开展鸡肉或鸭肉肉源成分的免疫学检验鉴别工作具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术缺陷，提供一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫检测试剂盒，该酶联免疫试剂盒具有灵敏度、精密度、准确度高，交叉反应率低，适合大批量样品检测等优点。此外，本发明进一步提供该检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒的制备方法与应用。

本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。

一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒，该酶联免疫试剂盒采用双抗夹心法，由包被有捕获抗体的酶标板、酶标记的检测抗体、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液组成。

上述酶联免疫试剂盒，所述捕获抗体由保藏编号为CCTCC NO:C202003的杂交瘤细胞株skTnI-3E7分泌得到，该细胞株于2019年12月10日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏；所述检测抗体为抗鸡骨骼肌肌钙蛋白I多克隆抗体。