[发明专利]一种电泳凝胶染色脱色方法

说明书

本发明公开了一种电泳凝胶染色脱色方法，包括染色液的配制、脱色液的配制、染色与脱色三个步骤，利用超声波技术加速了凝胶染色及脱色的过程，与传统的凝胶染色脱色方法相比，本发明无需高温或无需长时间高温；操作快速方便、效率高；适用性强，可用于所有蛋白质电泳凝胶染色脱色处理。

技术领域

本发明属于分子生物学技术和蛋白质学技术领域，具体涉及一种电泳凝胶染色脱色方法。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE)已成为现代生物学研究中重要的技术手段，是对蛋白质进行纯度及含量鉴定的一种经济、快速、可重复的方法。SDS-PAGE电泳易于操作、用途广泛，已成为许多研究领域中一种重要的分析技术，通常用来分析蛋白质亚基、膜蛋白、肽类等物质，还可以用于大分子物质的折叠结构等方面的研究。由于SDS带有大量的负电荷，消除了蛋白质分子之间原有电荷的差异。所以，蛋白质的迁移率仅取决于蛋白质的分子质量的大小。与已知分子质量的标准品比较，就可以测定蛋白质的分子质量。

常用考马斯亮蓝对SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行染色，传统的操作方法是将染色液（脱色液）和凝胶放置于塑料饭盒等容器中，将容器放在振荡摇床上振荡染色及脱色，如专利CN 106596233A公开了一种电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，步骤如下：步骤一、配制含有考马斯亮蓝R250、甲醇、乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。步骤二、配制含有乙醇、乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶2～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗2～4次；该技术方案是在常规技术方法上进一步优化，省略掉前固定等程序，染色和脱色速度快、效果好。但其操作步骤相对繁琐、且耗时长。此外，也有使用微波炉加热染色脱色，但该方法对操作精准度要求比较高，一旦温度和时间控制不当，凝胶不能耐受高温或长时间高温，易破碎。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明提供了一种电泳凝胶染色脱色方法，利用超声波技术加速了凝胶染色及脱色的过程，与传统的凝胶染色脱色方法相比，本发明无需高温或无需长时间高温；操作快速方便、效率高；适用性强，可用于所有蛋白质电泳凝胶染色脱色处理。

本发明提供的技术方案如下：

一种电泳凝胶染色脱色方法，包括以下步骤：

（1）染色液的配制：配制含有20~60vol%的有机醇溶液、0~20vol%酸溶液、0.1～0.2vol%的0.5~1mg/mL考马斯亮蓝染料、去离子水定容的染色液，混匀后静置1～2h，过滤后室温保存待用；

（2）脱色液的配制：配制含有0~20vol%的有机醇溶液、0~20vol%的酸溶液、去离子水定容的脱色液待用；

（3）染色、脱色：将电泳后的SDS-PAGE凝胶置于超声波发射装置中，泵入染色液至指定体积后，使SDS-PAGE凝胶浸泡在染色液中，开启超声波染色，结束后超声停止，泵出染色液，泵入脱色液至指定体积后，使SDS-PAGE凝胶浸泡在脱色液中，开启超声波脱色，结束后超声停止，泵出脱色液即可。

优选地，染色温度为80~90℃；脱色温度为80~90℃。

优选地，超声波功率为500~1500W；超声波频率为25~40kHZ。

优选地，染色液染色次数为1~2次，单次染色时间为5~10min。

优选地，脱色液脱色次数为2~3次，单次脱色时间为5~10min。

优选地，步骤（1）中，所述有机醇溶液为甲醇、乙醇或异丙醇；所述酸溶液为有机酸溶液或无机酸溶液。