[发明专利]一种金枪鱼源性成分的标记肽及在胶原降解物和其制品检测中的应用

说明书

本发明公开了一种金枪鱼源性成分的标记肽及其在胶原降解物和其制品检测中的应用，属于检测技术领域。本发明涉及金枪鱼源性成分的标记肽Leu‑Gly‑Pro‑Hyp‑Gly‑Pro‑Val‑Gly‑Ala‑Arg，可通过检测该标记肽，来确定是否含有金枪鱼源性成分。具体地，通过对样品中的蛋白成分进行胰酶酶切，使标记肽游离出来，然后通过液质联用仪检测是否含有该标记肽，来判定是否含有金枪鱼源性成分。该方法具有特征性强，灵敏度高，操作简单，可对胶原降解物及其制品中的金枪鱼源性成分进行测定。

技术领域

本发明涉及一种金枪鱼源性成分的标记肽及在胶原降解物和其制品检测中的应用，属于医药与食品检测领域。

背景技术

胶原在动物体内含量非常丰富，主要存在于在动物的骨、皮、筋、腱和鳞等结缔组织中。明胶是胶原的降解物，是由动物的骨、皮、筋、腱和鳞等为原料经适度水解而制得，具有优良的理化性能，广泛应用于食品、医药等诸多领域。明胶绝大部分是由猪和牛的皮或骨为原材料，但由于家禽和牲畜的疾病可能带来的安全风险、清真和宗教信仰不同，对明胶进行动物源性成分溯源具有重要意义。

随着人们生活水平的提高，与家禽、牲畜等为原料制备的明胶相比，鱼明胶被认为更安全和健康，其中尤以金枪鱼为原料制备的明胶最为珍贵。明胶中主要成分为胶原蛋白多肽，可利用液质联用仪检测多肽来进行动物源性成分的溯源，然而由于多肽在同一物种中存在突变等现象，选定的多肽能否作为溯源的标记，关系到溯源的成功与否。而对金枪鱼源性成分溯源的标记肽的选择，不但要克服基因突变带来的影响，而且还需在金枪鱼中含有，而其他动物中不含有。选择金枪鱼中不突变的标记肽，成为金枪鱼源性成分溯源的关键。直接采用液质联用仪对样品进行检测分析，无法克服上述困难。从基因入手，分析寻找标记肽，是一条可行的路径。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了一种金枪鱼源性成分的标记肽及在胶原降解物和其制品中金枪鱼源性成分的检测方法，该方法操作简单，特征性强，灵敏度高，可用于胶原降解物及其制品中金枪鱼源性成分的溯源鉴定和含量测定。

本发明的技术方案如下：

一种金枪鱼源性成分的标记肽及在胶原降解物和其制品检测中的应用，基于金枪鱼的胶原蛋白序列中包含标记肽，其氨基酸序列为Leu-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Arg，其中Hyp为4羟基脯氨酸或3羟基脯氨酸。它是从牛、猪、马与金枪鱼中COL1A1蛋白的mRNA出发，找出金枪鱼的稳定存在的特征mRNA序列，翻译成蛋白序列后利用液质联用技术检测，最终选定的标记肽。

该标记肽在胶原降解物及其制品检测中的应用，包括以下步骤：

(1)待检测样品用胰蛋白酶进行酶切，或提取待检测样品中的蛋白成分用胰蛋白酶进行酶切；

(2)放入液质联用仪，并于标记肽或金枪鱼源成分的明胶作为参照，选择母离子m/z469及其子离子进行监测；如果检出该离子的保留时间与对照品一致，且其子离子与对照品的子离子一致，则所述胶类中药或其制品含有金枪鱼源性成分，金枪鱼源性成分含量可由对照品与检测样品中的峰面积来计算；如果没有与对照品保留时间一致的该离子，则不含有金枪鱼源性成分。

上述在胶原降解物是由动物的骨、皮和鳞等为原料经水解所制得的明胶，胶原降解物制品是原料中含有明胶的食品、保健品或药品。

采用本发明的方法，能够快速检测胶原降解物及其制品中是否含有金枪鱼源性成分。尽管动物中存在基因突变导致蛋白序列差异，但本发明的标记肽的基因在金枪鱼中保守性强，且为金枪鱼特有，通过该标记肽，可对胶原降解物及其制品中金枪鱼源性成分进行溯源检测。

附图说明

图1是金枪鱼明胶中标记肽的子离子扫描质谱图(母离子m/z469，子离子扫描范围m/z200～1200)；

图2是各种动物明胶SRM扫描模式下选择离子对m/z469→669.1，556.4监测的质谱图；