[发明专利]一种Vero细胞无血清培养基及其用途

说明书

本发明涉及一种Vero细胞无血清培养基及其用途，所述Vero细胞无血清培养基包括基础培养基DMEM/F12和添加组分，添加组分为：乙二胺四乙酸二钠1～10mg/L、二水合乙醇胺盐酸盐5～30mg/L、乙二胺四乙酸铁纳2～25mg/L、重组表皮生长因子(rhEGF)0.005～0.02mg/L、重组胰岛素1～10mg/L、重组纤连蛋白0.1～5mg/L、亚油酸钠0.05～0.5mg/L、肉豆蔻酸0.05～0.5mg/L、硬脂酸0.05～0.8mg/L、肌醇6～80mg/L、维生素B6 1～10mg/L、维生素B7 0.1～0.8mg/L。本发明还包括所述培养基在培养Vero细胞中的应用。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体地说，是一种Vero细胞无血清培养基及其用途。

背景技术

Vero细胞(African green kidney cell，Vero cell)是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。目前已用于多种疫苗的生产。与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其它一些传代细胞基质相比，Vero细胞具有以下特点：①来源方便，可连续传代，生长速度快；②对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高；③遗传性状稳定，恶性转化程度低，生物安全性较高；④培养条件要求不苛刻，易于在生物反应器实施大规模培养。

培养基是影响体外培养细胞的形态、生长、代谢、增殖乃至生存的最直接和最重要的环境因素。由于Vero细胞的培养需要在适宜的介质表面贴附、铺展才开始有丝分裂、增殖，病毒的有效感染和增殖也有赖于细胞的贴附生长状态，适用于Vero细胞微载体培养的无血清培养基应能有效地支持细胞在微载体表面的贴附、铺展。由此，不仅提高了Vero细胞无血清培养基配方成分的复杂程度，也加大了Vero细胞无血清培养基的成本控制压力。

在疫苗生产中，为实现细胞的高密度培养，通常会在基础培养基中添加5％-10％的血清，血清可以提供细胞生长所需的多种营养物质，如激素、微量元素、贴壁因子等。但使用血清存在很多不足：①血清批间存在差异，影响疫苗生产工艺的稳定性和质量；②使用血清容易引起微生物污染；③血清成分复杂，同时存在促进细胞生长的物质和抑制细胞生长的物质，对细胞生长及后续下游纯化造成影响；④血清价格昂贵；⑤政策法规和行业指导原则不断严格，生物制品去血清化生产是未来的趋势。

中国专利申请：CN101864393B公开了一种用于Vero细胞微载体培养的无动物来源成分无血清培养基。该无血清培养基由DMEM/F12(1∶1)培养基和表皮生长因子、胰岛素、血清胺、金精三羧酸、生物素、维生素C、氨基酸、果糖、海藻糖、微量元素、羟丙基-β-环状糊精等培养基添加成分组成。中国专利申请：CN108103007A公开了一种适合Vero细胞生长的低血清培养基，将常规培养小牛血清用量由10％(V组分)降至2％，并且将常规添加的动物源成分替换成植物源成分和重组蛋白。但是关于本发明目前一种Vero细胞无血清培养基及其用途还未见报道。

本发明开发了一种适用于Vero细胞的无血清培养基，使用本发明所提供的培养基培养细胞，能够在不添加血清的情况下，显著提高细胞的扩增效率。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种Vero细胞无血清培养基。

本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述Vero细胞无血清培养基的用途。

本发明的第三个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述Vero细胞无血清培养基培养乙脑病毒或脊髓灰质炎病毒或狂犬病毒的方法。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种Vero细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加组分，所述基础培养基是：DMEM/F12，所述添加组分由以下成分组成：乙二胺四乙酸二钠、二水合乙醇胺盐酸盐、乙二胺四乙酸铁纳、rhEGF、重组胰岛素、重组纤连蛋白、亚油酸钠、肉豆蔻酸、硬脂酸、肌醇、维生素B6、维生素B7。