[发明专利]一种猪胰岛素的制备方法

说明书

本发明涉及一种猪胰岛素的制备方法，本发明将经猪胰腺提取的猪胰岛素，经离子交换及反相层析纯化可以制备得到纯度99％以上的猪胰岛素，再经结晶洗涤干燥过程获得猪胰岛素成品；本发明中经离子交换层析纯化的猪胰岛素再经反相层析纯化得到的纯度可达99％收率达92％，结晶洗涤干燥后得到的成品的纯度达到99％；本发明进一步提高了猪胰岛素的纯度，降低了相关杂质蛋白的含量，同时涉及的有机溶剂仅为廉价易得的工业乙醇，降低了生产成本，提高产品的品质。

技术领域

本发明涉及药物合成及化工领域，特别涉及一种猪胰岛素的制备方法。

背景技术

糖尿病是一种常见的代谢内分泌疾病，其已成为继心脑血管疾病、恶性肿瘤的第三大威胁人类健康的慢性非传染性疾病。糖尿病常常伴有多种并发症，容易引起多种器官损害、功能性障碍和衰竭，危害很大。目前，中国已成为世界上糖尿病患者人数最多的国家。

胰岛素为最有效的糖尿病治疗药物之一，而猪胰岛素来自猪胰腺的提取，方便易得，同时价格较其他胰岛素便宜，能够满足部分贫困地区的需求。市售猪胰岛素纯度偏低，同时生产过程涉及有机溶剂受限。

发明内容

为解决现有技术中存在的上述技术问题，提供一种猪胰岛素制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种猪胰岛素制备方法，包括以下步骤：

步骤1，将经猪胰腺提取的胰岛素进行离子交换，锌盐沉析离心并收集蛋白沉淀；

步骤2，将步骤1获得的蛋白沉淀复溶，经反相层析纯化，锌盐沉析离心并收集蛋白沉淀；

步骤3，将步骤2获得的蛋白沉淀复溶，并对复溶液进行结晶得结晶溶液；

步骤4，将步骤3所述结晶溶液离心得猪胰岛素结晶，对结晶进行洗涤；

步骤5，将结晶置于不锈钢盘碾碎并于真空箱中干燥，制得胰岛素成品。

本发明步骤1提取胰岛素的方法、离子交换的方法可以为本领域的常规方法。

本发明步骤1和2中锌盐沉析离心并收集蛋白沉淀可以采用本领域的常规方法。

优选地，所述步骤2中，步骤1获得的蛋白沉淀按蛋白质量与溶液体积比1:8～12(g/ml)复溶，优选1:10(g/ml)复溶；pH优选为3～4，更优选为3.5；复溶所用的溶液优选为注射用水。

优选地，步骤2中，反相层析采用的填料为UniPS 10-300，所采用的层析系统为Relianx高压层析系统。

优选地，所述步骤2中，反相层析通过洗脱液洗脱获得目标产物；所述洗脱液由洗脱缓冲液A与洗脱缓冲液B组合使用；

所述缓冲液A，B为乙酸铵缓冲液、氯化钠缓冲液、乙酸钠冲液中任意一种，所述缓冲液A，B中还可以包括：有机相；所述有机相优选为乙醇；

优选地，所述缓冲液A为体积分数为5～15％的乙醇和0.01-0.5mol/L氯化钠形成的缓冲液；所述缓冲液B为质量分数为40～60％的乙醇和0.01-0.5mol/L氯化钠形成的缓冲液。

优选地，缓冲液A和缓冲液B中所述氯化钠浓度为0.01-0.2mol/L，最优为0.1mol/L；缓冲液A中乙醇的质量分数为10％，缓冲液B中乙醇的质量分数为50％。

优选地，所述步骤2中，缓冲液A和缓冲液B的pH为2.0-4.5，优选为3.0-4.0，最优为3.0。

优选地，所述步骤2中，反相层析的载量为5-20mg/ml，优选为5-15mg/ml，最优选为10mg/ml。