[发明专利]一种基于大麻肽(r)VD-Hpα和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于大麻肽(r)VD‑Hpα和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用，即基于(r)VD‑Hpα的N末端序列与神经肽FF的C末端序列构建而成的全新嵌合肽VF‑11和VF‑13。与现有技术相比，本发明具有如下优势：(1)与已报道的(r)VD‑Hpα及(m)VD‑Hpα相比，VF‑11和VF‑13在体内的镇痛活性有所加强，产生了比母体分子更有效的镇痛效果。(2)VF‑11和VF‑13解决了经典大麻类激动剂以及母体分子存在的镇痛耐受的问题，产生了无耐受形式的镇痛效果，可用于急性痛和病理性疼痛的治疗。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种基于大麻肽(r)VD-Hpα和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用。

背景技术

疼痛是人类进化过程中为保护自身完整性而形成的一种感觉机制。然而，一些慢性、难治愈的疼痛严重影响人们的生活质量，在临床治疗中存在极大的挑战。大麻类物质被用于疼痛的治疗已有几千年的历史(J Psychoactive Drugs.1981,13(1):23；Pain ResManag.2001,6(2):80)。生物体内的大麻系统主要包括两种大麻受体(CB1受体和CB2受体)，内源性大麻配体以及相关的代谢酶类。CB1受体在全身的分布范围较广，尤其在中枢神经系统分布最多；CB2受体的分布区域相对比较保守，主要在免疫细胞和组织中表达(Adv ClinExp Med.2007,16(6):807)。经典的内源性大麻配体包括花生四烯乙醇胺(AEA)(Science.1992,258(5090):1946)和花生四烯酰甘油(2-AG)(Biochem Pharmacol.1995,50(1):83)。研究表明，大麻系统在疼痛调节过程中扮演重要的角色。

2003年，来源于血红蛋白α链的片段hemopressin(PVNFKFLSH-OH)被首次鉴定(JBiol Chem.2003,278:8547)。Hemopressin对于急性疼痛和病理性疼痛均可产生明显的镇痛效果(Proc Natl Acad Sci U S A.2007,104(51):20588；Peptides.2005,26(3):431)。VD-hemopressin(α)(VD-Hpα)是体内存在的hemopressin的N末端延伸片段，在体外功能实验中表现为CB1受体的激动剂(FASEB J.2009.23:3020)。不同种属哺乳动物体内VD-Hpα之间存在很高的氨基酸序列同源性(Neuropeptides.2017,63:83)。进一步的药理学研究表明，中枢注射VD-Hpα可以在小鼠不同临床前痛模型中产生明显的镇痛作用。此外，VD-Hpα参与到心血管调节、摄食、运动活性、胃肠运动和体温调节等生理过程。然而，与经典的大麻配体WIN55,212-2一样，侧脑室连续注射VD-Hpα产生明显的耐受现象(Neuropeptides.2017,63:83；J Pharmacol Exp Ther.2014,348:316)。

神经肽FF(NPFF)于1985年被首次在牛脑中分离。NPFF系统包括两种受体前体(Pro-NPFF_A和NPFF_B)和两种受体(NPFF₁和NPFF₂)(FEBS Lett.1997,409:426；MolPharmacol.1999,55:804)。研究表明，NPFF系统参与体内多种生理过程，例如摄食、体温和胃肠运动。此外，NPFF作为一种内源性肽类配体对阿片诱导的镇痛、耐受和成瘾产生显著的调节效果。近年来的药理学研究表明，NPFF不仅表现出抗阿片活性，而且其对大麻类物质的镇痛以及耐受和便秘副作用也有明显的调节作用(Eur J Pharmacol.2015,767:119；Anesth Analg.2015,121:1360)。因此，NPFF对大麻的调节作用使两者作为化学模板分子来发展全新嵌合肽。