[发明专利]一种提升凝结芽孢杆菌芽孢数量的发酵方法

说明书

本发明公开了一种提升凝结芽孢杆菌芽孢数量的发酵方法，涉及细菌培养技术领域。该方法包括将凝结芽孢杆菌接种至发酵培养基内，在发酵后分别向发酵培养基中进行第一次补料和第二次补料；其中，发酵罐的培养基的组分包括：碳源、氮源、镁盐、锰盐、钠盐、钾盐、番茄红素、碳酸钙和麸皮。第一次补料时，加入补料碳源和补料氮源；第二次补料时，加入碳酸钙、麸皮、玉米芯和氨基酸。本申请通过添加番茄红素、碳酸钙和麸皮作为培养基的组分，能够抑制菌种退化，促进凝结芽孢杆菌产生芽孢。随后进行两次补料，能补充培养基在发酵过程中所需的组分，有利于增加芽孢的生成量，提高发酵后续产品中凝结芽孢杆菌的总菌体数、芽孢率、芽孢数及保存能力。

技术领域

本发明涉及细菌培养技术领域，具体而言，涉及一种提升凝结芽孢杆菌芽孢数量的发酵方法。

背景技术

凝结芽孢杆菌是一类能形成芽孢、能产乳酸的革兰氏阳性菌。菌体呈杆状，两端钝圆，单个或成短链，可产生芽孢，芽孢端生。其具有一般乳酸菌维持肠道微生态平衡、提高机体消化功能和健康水平的能力外，还具有芽孢菌的抗胃酸、抗胆碱、抗热和抗干燥等抗逆能力。

近年来，微生态制剂在养殖中的使用逐渐增多，而凝结芽孢杆菌由于其兼具乳酸菌和芽孢杆菌的特点，近年来逐渐开始受到人们的重视，已经成为国内外研究的一个重点，菌剂产品中的凝结芽孢杆菌需要处在芽孢状态才能有高抗逆性，因此如何获得高浓度高活性的芽孢是制约凝结芽孢杆菌制剂生产的关键因素。国内有少数厂家尝试生成凝结芽孢杆菌类产品，但是芽孢率普遍较低，导致相关产品质量普遍不高，因此，寻找一种能提升芽孢率与芽孢数的工艺就尤为重要。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供提升凝结芽孢杆菌芽孢数量的发酵方法。

本发明是这样实现的：

第一方面，实施例提供一种提升凝结芽孢杆菌芽孢数量的发酵方法，其包括将凝结芽孢杆菌接种至发酵培养基内，在发酵后分别向所述发酵培养基中进行第一次补料和第二次补料；

其中，所述发酵罐的培养基的组分包括：碳源4-4.8g/L、氮源9.5-11.4g/L、镁盐0.1-0.12g/L、锰盐0.05-0.06g/L、钠盐2-2.4g/L、钾盐2-2.4g/L、番茄红素0.5-0.6g/L、碳酸钙0.5-0.6g/L和麸皮10-12g/L；

所述第一次补料时，向所述发酵培养基中加入补料碳源1-1.2g/L和补料氮源1-1.2g/L；所述第二次补料时，向所述发酵培养基中加入碳酸钙0.5-0.6g/L、麸皮10-12g/L、玉米芯0.5-0.6g/L和氨基酸0.35-0.46g/L。

在可选的实施方式中，所述补料碳源包括葡萄糖、玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉、大米糖化液、蔗糖中的一种或几种；优选地，所述补料碳源为葡萄糖；

可选地，所述补料氮源包括蛋白胨、酵母浸粉、玉米浆干粉、豆饼粉、花生饼粉和鱼粉中的一种或几种；优选地，所述发酵培养基加入的中1-1.2g/L的所述补料氮源包括蛋白胨0.5-0.6g/L和酵母浸粉0.5-0.6g/L；

可选地，所述发酵培养基中加入的0.35-0.46g/L的所述氨基酸包括蛋氨酸0.3-0.4g/L和异亮氨酸0.05-0.06g/L。

在可选的实施方式中，所述凝结芽孢杆菌于所述发酵培养基中开始发酵后10-12h进行所述第一次补料；

优选地，所述凝结芽孢杆菌于所述发酵培养基中开始发酵后18-20h进行所述第二次补料。

在可选的实施方式中，在将所述凝结芽孢杆菌接种至所述发酵培养基时，将所述发酵培养基内的搅拌速度调节至150-200r/min；