[发明专利]一种牧草全株植物色素的提取测定方法

说明书

本发明属于植物色素测定技术领域，特别涉及一种牧草全株植物色素的提取测定方法，包括采集牧草全株植物冷冻干燥后粉碎，和丙酮溶液混合，4℃下离心保留上清液，再利用丙酮溶液重复离心提取几次，加入0.1mg/mL的内标溶液trans‑b‑apo‑80‑carotenal混匀，用纯丙酮稀释后滤膜过滤，进行HPLC分析得各色素含量。本发明可通过一次测定出牧草全株植物中多种色素的含量，测定全面，分析效率高，操作简单，便捷，分析结果更准确。

技术领域

本发明属于植物色素测定技术领域，特别涉及一种牧草全株植物色素的提取测定方法。

背景技术

植物中，特别是牧草中富含大量的植物光合色素，而牧草是反刍动物重要的粗饲料来源，牧草中的植物色素资源具有抗氧化作用，对动物以及动物产品都具有积极意义。不仅是在动物营养领域，在食品科学，植物学，饲料学中，都涉及到植物色素的相关研究。然而，在传统的分析方法中，大多的提取方法多为液氮速冻后研磨，再用PBS溶液提取，用试剂盒处理后再用酶标仪分析，还有一些方式是用有机溶剂提取，之后用分光光度计分析。上述分析方法主要存在如下两个弊端：一是分析准确性不能保证，过于依赖试剂盒，试剂盒保存期较短，误差极大，成本较大，这加大了分析效率和成本；二是多种色素不能通过同一次检测液中测定，需要用不同份原料重复提取测定，如果测定色素指标较多的情况下，工作量特别大，分析效率低下。因此，本申请研究了一种牧草全株植物色素的提取测定方法。

发明内容

本发明可通过一次测定出牧草全株植物中多种色素的含量，测定全面，分析效率高，操作简单，便捷，分析结果更准确。

本发明提供了一种牧草全株植物色素的提取测定方法，包括以下步骤：

S1，采集牧草全株植物冷冻干燥后粉碎，得样品粉末，冷冻保存待用；

S2，将S1中样品粉末和丙酮溶液以料液比30:9mg/ml混匀，得混合物；

S3，4℃下静置3-4h，得样品溶液；

S4，将S3中样品溶液在4℃下离心，保留上清液并在2-8℃下保存；

S5，在S4中的上清液中加入相当于S2中等量的丙酮溶液混匀，依次重复S3和S4操作，然后加入相当于S2中5/9体积的丙酮溶液，2-8℃下静置12-13h，重复S4操作，再加入相当于S2中5/9体积的丙酮溶液，2-8℃下静置1-1.5h，再重复S4操作，补充丙酮溶液至S2中样品粉末数值的体积，得提取溶液；

S6，将S5中提取溶液中以30:1体积比的加入0.1mg/mL的内标溶液trans-b-apo-80-carotenal混匀，得待检溶液；

S7，将S6待检溶液用纯丙酮稀释4-5倍，滤膜过滤，进行HPLC分析，得各色素含量。

优选地，所述牧草为王草、黑麦草、木薯叶、苜蓿草、玉米青贮中的其中一种。

优选地，所述全株植物粉碎前置于－80℃下保存0-6个月。

优选地，S4中离心条件为：3500r/min、10min。

优选地，所述丙酮溶液的体积浓度为80％-100％，且溶剂为蒸馏水

优选地，所述丙酮溶液的体积浓度为80％。

优选地，所述HPLC分析的色谱柱型号为C8、规格为3.5μm、4.6×150mm。

优选地，所述C8色谱柱中的A流动相组成为：甲醇、乙腈、0.25mol/L吡啶水溶液以体积比50:25:25组成，且用醋酸调节pH至4.98-5.03；B流动相组成为：甲醇、乙腈、丙酮以体积比20:60:20组成。

优选地，所述色素为脱镁叶绿酸a、叶黄素、叶绿素b、叶绿素a、脱镁叶绿素b、脱镁叶绿素a、β-胡萝卜素中的一种或几种。