[发明专利]一种牧草全株植物色素的提取测定方法

权利要求书

1.一种牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，采集牧草全株植物冷冻干燥后粉碎，得样品粉末，冷冻保存待用；

S2，将S1中样品粉末和丙酮溶液以料液比30:9mg/ml混匀，得混合物；

S3，4℃下静置3-4h，得样品溶液；

S4，将S3中样品溶液在4℃下离心，保留上清液并在2-8℃下保存；

S5，在S4中的上清液中加入相当于S2中等量的丙酮溶液混匀，依次重复S3和S4操作，然后加入相当于S2中5/9体积的丙酮溶液，2-8℃下静置12-13h，重复S4操作，再加入相当于S2中5/9体积的丙酮溶液，2-8℃下静置1-1.5h，再重复S4操作，补充丙酮溶液至S2中样品粉末数值的体积，得提取溶液；

S6，将S5中提取溶液中以30:1体积比的加入0.1mg/mL的内标溶液trans-b-apo-80-carotenal混匀，得待检溶液；

S7，将S6待检溶液用纯丙酮稀释4-5倍，滤膜过滤，进行HPLC分析，得各色素含量。

2.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述牧草为王草、黑麦草、木薯叶、苜蓿草、玉米青贮中的其中一种。

3.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述全株植物粉碎前置于－80℃下保存0-6个月。

4.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，S4中离心条件为：3500r/min、10min。

5.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述丙酮溶液的体积浓度为80％-100％，且溶剂为蒸馏水。

6.如权利要求5所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述丙酮溶液的体积浓度为80％。

7.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述HPLC分析的色谱柱型号为C8、规格为3.5μm、4.6×150mm。

8.如权利要求7所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述C8色谱柱中的A流动相组成为：甲醇、乙腈、0.25mol/L吡啶水溶液以体积比50:25:25组成，且用醋酸调节pH至4.98-5.03；B流动相组成为：甲醇、乙腈、丙酮以体积比20:60:20组成。

9.如权利要求1所述的牧草全株植物色素的提取测定方法，其特征在于，所述色素为脱镁叶绿酸a、叶黄素、叶绿素b、叶绿素a、脱镁叶绿素b、脱镁叶绿素a、β-胡萝卜素中的一种或几种。