[发明专利]一种银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中酚酸苷类成分的测定方法

说明书

本发明公开了一种银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中酚酸苷类成分的测定方法，属于银杏叶活性成分检测技术领域。用蜗牛酶水解由银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液配制的样品液，然后采用HPLC法进行测定。本发明的测定方法条件温和、准确性和精密度良好、操作简单方便，能够对银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中的酚酸苷类成分进行快速测定。

技术领域

本发明涉及银杏叶活性成分检测技术领域，具体涉及一种银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中酚酸苷类成分的测定方法。

背景技术

银杏叶是最常用的药用植物之一，现代药理学研究表明，银杏叶提取物具有血管保护、心肌保护、神经保护、抗骨质疏松、肝保护和肾保护等作用。近年来，关于银杏叶的研究多集中在其药理作用和临床应用方面，而对其化学成分的研究在近20多年来并无实质性进展。银杏叶中主要药效成分是黄酮醇苷和银杏内酯，二者含量在银杏叶提取物EGb中各占24％和6％。此外，有机酸，如原儿茶酸、咖啡酸有抗氧化作用，且有机酸在EGb中含量达13％。研究发现，银杏叶提取物和舒血宁注射液中游离有机酸的含量很低，舒血宁注射液中原儿茶酸仅为几ug/mL的浓度水平。1999年Ellnain-Wojtaszek等报道银杏叶中酚酸类成分有游离状态的，但更多是以共价键结合态存在。

鉴于上述情况，有必要对银杏叶、提取物及其制剂中的酚苷类成分进行研究。由于酚酸苷类成分极性大，单体难以分离制备，且无法购买到相应的对照品，所以对银杏叶及相关产品中酚酸苷类成分的测定报道很少。除1999 年Ellnain-Wojtaszek等采用盐酸水解法获得酚酸苷元对酚酸苷类成分进行间接测定外，并无其他研究报道。由于有些酚酸苷元在盐酸高温加热时不稳定，导致检测结果不太理想。

发明内容

本发明的目的是提供一种银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中酚酸苷类成分的测定方法，以解决现有检测方法检测效果不佳的问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液中酚酸苷类成分的测定方法，用蜗牛酶水解由银杏叶、银杏叶提取物和舒血宁注射液配制的样品液，然后采用HPLC法进行测定。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述测定方法包括以下步骤：

(1)将由银杏叶、银杏叶提取物或舒血宁注射液配制得到的样品液与醋酸-醋酸钠缓冲液混合，加入蜗牛酶在35-38℃下酶解30-48h，将得到的酶解液定容，离心，得到上清液；

(2)将所述上清液用HPLC法进行测定。

优选地，在35℃下酶解48h；或者，在38℃下酶解30h；或者，在37℃下酶解40h。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述HPLC法的检测条件包括：

流动相：A相：30mM的甲酸铵和0.2％甲酸混合液；B相：乙腈；C相： 20％乙腈；

流速：0.9mL/min；

进样量：3uL；

柱温：30℃；

检测波长：0min：260nm；20min：310nm；

色谱柱：柱长，内径：4.6x150mm；粒径：2.7μm；

洗脱梯度：0min：98％A和2％B；16min：98％A和2％B；25min： 70％A和30％B；26min：100％C；30min：100％C；31min：100％B；40min： 100％B。

需要说明的是，A相：30mM的甲酸铵和0.2％甲酸混合液，是指浓度为 30mM的甲酸铵水溶液中含有体积浓度为0.2％的甲酸的混合液。20％乙腈是指，体积浓度为20％的乙腈水溶液。