[发明专利]一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN）的方法

说明书

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的定量检测方法。本方法用甲醇进行超声提取工业大麻花叶中的大麻酚（CBN)，用高效液相色谱仪（HPLC）对待测液进行检测。采用外标法定量得到花叶样品中大麻酚（CBN)的含量。本方法操作简单、分离效果好、稳定性好，使得大麻花叶中的大麻酚（CBN）得到快速准确的定量。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法。

背景技术

工业大麻是指四氢大麻酚（THC）含量低于0.3%的大麻，是大麻科大麻属一年生草本植物，大麻中的主要活性成分是大麻素类化合物，主要的大麻酚类化合物有四氢大麻酚（THC）、大麻酚（CBN）、大麻二酚（CBD）、大麻萜酚（CBG）、大麻环萜酚（CBC）等，其中前三者约占大麻酚类化合物的90% 以上。

目前人们对大麻素的研究主要集中在四氢大麻酚和大麻二酚，对大麻酚 (以下简称CBN)的研究较少。CBN为叶状结晶体，具有镇定、止咳、抗痉挛、安眠等作用，含量很少，精神活性是THC 的 1/10，是一个极具医疗用途的大麻素。

现有技术中大部分关于大麻酚类化合物成分的检测都局限于THC和CBD的检测。CBN有较高的医用价值，故准确测定花叶原料中的CBN含量十分重要。但目前尚未有权威的CBN检测标准，因此开发一种能够准确测定工业大麻花叶中CBN含量的检测方法十分必要。

发明内容

本发明使用甲醇超声提取工业大麻花叶中的大麻酚（CBN），用高效液相色谱仪(HPLC)检测，外标法进行定量，能够准确、快速的检测工业大麻花叶中的大麻酚（CBN）含量。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种工业大麻花叶中大麻酚（CBN）含量的测定方法，包括如下步骤：

①样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于烘箱中60℃下干燥，粉碎机粉碎，混匀待测。

②样品的前处理：准确称取花叶样品于离心管中，加入有机溶剂，超声提取，离心收集上清液，残渣重复超声提取一次，离心，合并上清液，浓缩定容得到样品处理待测液。

③标准工作溶液的配置：将购买的大麻酚（CBN）标准溶液用甲醇稀释至浓度范围为1 μg/mL～100μg/mL的混合标准工作溶液，其浓度范围覆盖试样中待测组份的含量。

④用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。

高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220 nm。

进一步的，步骤①中所述大麻花叶为9月采摘的成熟工业大麻的叶和花苞组合物。

进一步的，步骤②中所述有机溶剂为色谱纯甲醇，甲醇所用体积量与花叶样品质量比为10:1；所述超声时间为20min，超声功率为250W，工作频率为40kHz；所述离心的转速为10000转/分钟，时间为5分钟。

进一步的，步骤③中所述配制浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的CBN系列标准工作溶液步骤为：

①将购自美国Sigma公司的CBN标准物质（1mg/mL，共1mL）转移至10mL容量瓶中，用色谱级甲醇洗涤原瓶及滴管数次，并全部转移至容量瓶中（注意转移过程中不能洒出），定容，得CBN溶液浓度为100μg/mL。