[发明专利]木芙蓉内源细胞分裂素提取剂及其使用方法

说明书

本发明属于内源激素提取技术领域，具体涉及一种木芙蓉内源细胞分裂素提取剂及其使用方法。本发明木芙蓉内源细胞分裂素提取剂，是由A剂和B剂按照质量比1～2:1的比例混合后制备而成；所述A剂是由甘氨酸、邻苯二甲酸、磷酸氢二钠、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠、乙酸、乙酸钠、盐酸中的至少2种，用重蒸水溶解后配制成pH在2～3的混合水溶液；所述B剂为甲醇。本发明木芙蓉内源细胞分裂素提取方法简单，成本低，对木芙蓉内源细胞分裂素的提取率高达86～95%，符合行业普遍认可的检测方法要求，本发明技术方案简单可行，更加适宜推广。

技术领域

本发明属于内源激素提取技术领域，具体涉及一种木芙蓉木芙蓉内源细胞分裂素提取剂及其使用方法。

背景技术

植物激素是指植物在正常发育过程中或特殊环境条件下，代谢产生或生物合成的天然有机化合物，以极微量的浓度产生明显的生理反应，在植物的组织器官分化、形态建成、生长发育、衰老等多种生理过程中起着重要的调节作用，也影响农作物产量、品质和抗性等重要性状。目前公认的六大类植物内源激素有植物生长素类(auxins)、赤霉素类(gibberenllins，GA)、细胞分裂素类(cytokinins，CK)、乙烯(ethylene)、脱落酸(abscisicacid，ABA)、油菜素甾醇类(Brassinosteroids，BRs)。

木芙蓉(Hibiscus mutabilis Linn.)又名芙蓉花、拒霜花、木莲、地芙蓉、华木，原产中国。其喜温暖、湿润环境，不耐寒，忌干旱，耐水湿。对土壤要求不高，瘠薄土地亦可生长。为锦葵科、木槿属落叶灌木或小乔木。花于枝端叶腋间单生。花、叶均可入药，有清热解毒，消肿排脓，凉血止血之效。木芙蓉内源细胞分裂素是植物体内合成的一系列痕量小分子化合物，在极低的浓度下就能发挥多种生理作用。木芙蓉内源细胞分裂素在植物体内含量极低、性质不稳定，其定量检测一直是当前研究的热点和难点。

公开号为CN103884810A，发明名称为“一种高效分离和测定草坪草内源细胞分裂素的方法”，采用的是取0.5g鲜样，用液氮研磨，然后加提取液5ml，-20℃提取过夜，得浸提液；所述的提取液即甲醇：甲酸：水＝15：1：4，按v/v，再加40mg/ml2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚作为抗氧化剂。公开号为CN103048404A，发明名称为“一种植物样品中内源性细胞分裂素的定量检测方法”，采用的是乙腈为提取剂。公开号为CN109991339A，名称为“一种测定微量植物样品中内源激素的样品预处理方法”，采用的是破壁酶为提取剂。

可见，对于植物内源激素的分析，首先选用合适的提取剂剂实现无损完全提取目标物，既要避免许多干扰物质，又要防止破坏内源激素本身，其次采用各种萃取或层析步骤，使内源激素得到部分提纯，然后再测定其含量。但是目前现有技术在提取内源激素时，普遍存在有机溶剂使用量大，提取方法复杂，成本高且提取率低，难以避免酚类、色素及蛋白质、脂类，核酸等非目标化合物对实验结果的干扰等问题。而且目前还未查见有直接针对木芙蓉组织/器官内源细胞分裂素提取的技术方案、检测方法及检测结果的论文、专利、科研成果等公开的文献报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明根据木芙蓉内源激素的特点，提出了一种有利于简化浸提液的纯化步骤，避免过多色素及杂质对检测结果的干扰的木芙蓉内源细胞分裂素提取提取剂及其使用方法。

本发明提供一种木芙蓉内源细胞分裂素提取剂，是由A剂和B剂按照质量比1～2:1的比例混合后制备而成；

所述A剂是由甘氨酸、邻苯二甲酸、磷酸氢二钠、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠、乙酸、乙酸钠、盐酸中的至少2种，用重蒸水溶解后配制成pH在2～3的混合水溶液；其中A剂原料组份比例关系因摩尔质量与理化特性差异进行适宜的调整，满足混合试剂pH在2-3之间即为本发明技术方案所述A剂，保持提取液为酸性介质环境，可以钝化植物组织中磷酸酶等酶的活性，以阻止磷酸酶等对细胞分裂素核苷酸水解过程，避免因酶解作用导致相应的核苷回收率升高从而影响检测结果；

所述B剂为甲醇。