[发明专利]一种用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，（1）合成发射红色荧光的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs；（2）ALP催化磷酸酪氨酸生成酪氨酸，酪氨酸酶催化反应生成的酪氨酸为左旋多巴，左旋多巴与间苯二酚反应生成发射蓝色荧光的物质CAZMON；（3）CAZMON与CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs发生内滤效应，使CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs的荧光被猝灭，根据CAZMON和CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs两者荧光强度的比值对ALP的浓度绘制标准曲线，测定的样品根据标准曲线法对ALP的浓度进行定量检测，该方法灵敏度高、选择性好、检测简便。

技术领域

本发明属纳米材料、荧光传感技术和生物分析检测领域，具体涉及基于量子点的比率荧光传感平台定量测定血清中碱性磷酸酶(ALP)的方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP)是生物系统中的一种非特异性的水解酶。ALP能够催化水解不同底物的磷酸基团，如：核酸、蛋白质、小分子物质等等，并且在细胞增殖、凋亡和信号转导方面发挥着重要作用。血清中异常的ALP水平与多种疾病密切相关。具体来说，血清中低表达ALP与一些代谢紊乱疾病相关，而血清中高表达ALP则与肝功能不全、骨疾病(成骨细胞瘤、软骨病)、前列腺癌和糖尿病密切相关。因此，发展一种灵敏的、选择性高的方法定量检测血清中ALP水平是极其重要的。

近年来，已有许多检测ALP的方法被报道，包括化学发光法、电化学法、表面增强拉曼散射法、比色法和荧光法。其中，电化学法和表面增强拉曼散射建立完好但步骤复杂。比色法简单高效，但是大部分方法依赖于紫外方法(TMB或AuNPs)，存在着灵敏度低的特点。目前，对于建立检测ALP荧光方法的探索已经取得了较大的进步。荧光方法灵敏度高，价格低廉，简单且信号易读。其中，单发射荧光探针易受不同种类环境因素的影响如检测条件、荧光探针的浓度。但是，比率荧光探针能够通过提供内参来降低分析物非依赖干扰信号。另外，比率荧光探针能够展现荧光颜色的变化，这有利于现场检测与诊断。据我们所知，目前还没有发展一种比率荧光探针用于可视化检测ALP的活性。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明的目的在于提供一种用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，基于量子点的比率荧光传感平台，具有灵敏度高、选择性好、检测简便的优点，大大减少了来自探针浓度，光源，仪器效率和测量条件的干扰，可以直接应用于血清中ALP的检测。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，步骤如下：

(1)、由于所合成的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs需要与反应生成的CAZMON发生内滤效应，那么就必须要求我们合成的量子点的激发光谱与CAZMON的紫外吸收光谱有重叠，同时量子点在加入CAZMON前后荧光寿命需要保持一致。因此，我们选择了根据以下参考文献来合成量子点(F.D.Wei,G.H.Xu,Y.Z.Wu,X.Wang,J.Yang,L.P.Liu,P.Zhou,Q.Hu,Molecularly imprinted polymers on dual-color quantum dots for simultaneousdetection of norepinephrine and epinephrine,Sens.Actuators B:Chem.229(2016)38-46)合成发射红色荧光的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs：将NaHTe溶液与Cd²⁺，MPA混合反应制备CdTe QDs。然后加入CdAc₂·2.5H₂O,ZnSO₄·7H₂O和MPA反应30min，接着加入Na₂S反应，最后加入TEOS反应，生成发射红色荧光的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs。