[发明专利]一种用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）、合成发射红色荧光的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs；

（2）、生成发射蓝色荧光的CAZMON：将ALP与底物磷酸酪氨酸以及酪氨酸酶共同孵育生成左旋多巴，加入间苯二酚使其与左旋多巴反应生成发射蓝色荧光的物质CAZMON；

（3）、制备比率型荧光探针：将步骤（1）所得的发红色荧光的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs与步骤（2）所得的发蓝色荧光的CAZMON混合，CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs的红色荧光被CAZMON猝灭，得到随着ALP浓度增加，蓝色荧光逐渐增强红色荧光逐渐减弱的比率型荧光探针；

（4）、根据荧光产物CAZMON在470 nm和CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs在620 nm处的荧光强度的比值对ALP的浓度绘制标准曲线；

（5）、检测ALP：在用PBS缓冲溶液稀释的血清中加入磷酸酪氨酸以及酪氨酸酶共孵育，再加入间苯二酚，孵育完成后加入步骤（1）中的CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs，测定探针的蓝色荧光与红色荧光的比值，根据标准曲线，得到血清中ALP的含量。

2.权利要求1所述的非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，ALP与磷酸酪氨酸和酪氨酸酶的共孵育时间为0.5-3.0h。

3.权利要求1所述的非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，底物磷酸酪氨酸浓度为200-800 μM。

4.权利要求1所述的非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，酪氨酸酶浓度为1-5 U/mL。

5.权利要求1所述的非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，间苯二酚浓度为0.3-0.9 mM。

6.权利要求1所述的非疾病诊断目的的用于定量检测血清中ALP的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，CdTe/CdS/ZnS/SiO₂ QDs浓度为0.5-1.5 mg/mL。