[发明专利]一种玉米秸秆固液两项发酵制备厚垣孢子生物修复剂的方法

权利要求书

1.一种玉米秸秆固液两项发酵制备厚垣孢子生物修复剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备液体培养基：

取秸秆酶解液100 ml，放入250ml三角瓶，加入（NH₄）₂SO₄ 0.4g-0.5g，K₂HPO₄ 0.1g-0.2g，CaCl₂ 0.1 -0.2g，MnSO₄·H₂O 0.3g，调节pH至5-5.1，高压灭菌20-30分钟，备用；

S2、液体发酵：

冷却后的液体培养基内接入已活化好的木霉菌T42-H，于26-28℃、160转/分震荡培养3天，在超净工作台无菌条件下，用已灭菌的电动搅拌器，在600转/分下搅拌5分钟，继续放入摇床培养1天，取样用血球计数板测厚垣孢子和分生孢子总数达到 10⁹个/ml，停止液体发酵；

将盛有发酵液的三角瓶，在超净工作台在600转/分下搅拌5分钟，作为种子液备用；

S3、制备固体培养基：

已预处理的玉米秸秆粉50-51g，麸皮1-2g，草炭2-3g，蔗糖0.1-0.2g，（NH₄）₂SO₄ 0.2-0.3g, KH₂PO₄ 0.1-0.2g，MgS0₄·7H₂0 0.08-0.1 g ，将其溶于100mL的水中，调节pH至6-6.1；

取150克装入300ml三角瓶，高压灭菌30-40分钟，备用；

S4、固液两项发酵：

灭菌后的固体培养基冷却后接入上述种子液80-85mL，同时加入纤维素酶和厚垣孢子促进剂，搅拌均匀放在28-29℃恒温培养箱中，培养30-35小时；

降低温度至25-26℃恒温避光培养67-70小时，用血球计数板测量固体发酵物的厚垣孢量达到10¹⁰/g，即可结束发酵出料；

常温风干或使用真空干燥器控制温度40-42℃干燥，即可得到厚垣孢子生物修复剂。

2.根据权利要求1所述的一种玉米秸秆固液两项发酵制备厚垣孢子生物修复剂的方法，其特征在于，

还包括S5、将干燥后的厚垣孢子生物修复剂，与草炭粉按1:100混合均匀，即可制得土壤生物修复剂产品。

3.根据权利要求1所述的一种玉米秸秆固液两项发酵制备厚垣孢子生物修复剂的方法，其特征在于，

所述厚垣孢子促进剂包括酵母葡聚糖和赤霉素溶液，其中，赤霉素溶液取5-8ml赤霉素，再用水稀释800倍溶液；

再取0.09-0.1克酵母葡聚糖溶解混合于赤霉素溶液中。

4.根据权利要求1所述的一种玉米秸秆固液两项发酵制备厚垣孢子生物修复剂的方法，其特征在于，S4中，加入8-10FPU/g底物的纤维素酶。