[发明专利]胎源性成年胆汁淤积性肝损伤动物模型、其特异性生物标志物及应用

说明书

本发明提供一种胎源性成年胆汁淤积性肝损伤动物模型、其特异性生物标志物及应用。所述动物模型采用以下方法步骤构建得到：取正常受孕的大/小鼠，在孕9‑20天期间给予0.2mg/kg.d地塞米松皮下注射；孕鼠自然生产F1子代仔鼠，选取窝仔数≥10只的窝仔，留取每窝仔数10只，且雌雄各半，仔鼠母乳喂养4周后断奶，并雌雄分笼继续正常饮食饲养；取正常饮食至28周龄的F1子代雌性仔鼠，检测血清和肝脏胆汁淤积性肝损伤相关指标，相关指标升高判定为胎源性成年胆汁淤积性肝损伤的发生。所述胎源性胆汁淤积性肝损伤动物模型对研究胎源性成年胆汁淤积肝损伤的发生机制，确定其毒性靶标，以及研发早期防治药物都具有重要意义。

技术领域

本发明涉及动物模型构建技术领域，具体涉及一种胎源性成年胆汁淤积性肝损伤动物模型、其特异性生物标志物及应用。

背景技术

已知胆汁淤积的发生是由于胆汁代谢异常或胆汁流动障碍所致，其可导致肝损伤，甚至纤维化、肝硬化。疏水性胆汁酸主要包括胆酸(cholic acid,CA)、鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)和鼠胆酸(muricholic acid,MCA)等，其在肝细胞内蓄积被认为是胆汁淤积性肝损伤发生的重要诱导因素。内质网应激(endoplasmic reticulumstress)已证实是成年胆汁淤积性肝损伤的主要发病机制之一。胆汁酸可以通过增加葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)诱导肝细胞线粒体损伤和内质网应激。C/EBP的同源蛋白(CCAT/enhancer-binding homologues protein,CHOP)为内质网应激诱导的转录调控因子，是内质网应激过程中高诱导表达基因之一，其缺失可减轻胆管结扎所致小鼠胆汁淤积性肝损伤。人群研究已发现宫内发育迟缓患儿出生后血清总胆汁酸浓度升高，提示宫内发育迟缓与胆汁酸代谢异常密切相关。

胆汁淤积性肝损伤动物模型的建立对于探寻防治药物具有十分重要的意义。目前成年胆汁淤积性肝损伤动物模型主要有：肝总胆管结扎模型、a-萘异硫氰酸酯诱导模型和雌激素苯甲酸雌二醇诱导模型等。其中，药物(如a-萘异硫氰酸酯、雌激素苯甲酸雌二醇)相关动物模型的造模方法具有简单易行、成功率高等优点，因而广泛用于成年胆汁淤积性肝损伤相关的研究。胎源性成年胆汁淤积性肝损伤主要表现为孕期受到不良环境的影响，导致子代出生后出现胆汁淤积性肝损伤症状。其疾病特点主要体现在疾病的诱因源于宫内，造成胆汁酸代谢相关基因如胆固醇-27羟化酶(cholesterol 27α-hydroxylase，CYP27A1)的编程改变，并持续至成年，成年时期即便无诱因仍可发生胆汁淤积性肝损伤。此外，成年胆汁淤积性肝损伤多表现为胆汁酸合成限速酶胆固醇-7羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase，CYP7A1)表达增加，因此现有的动物模型无法模拟胎源性成年胆汁淤积性肝损伤的病理生理状态，更无法用于胎源性成年胆汁淤积性肝损伤的发生机制及防治研究。我们至今尚未见国内外有胎源性成年胆汁淤积性肝损伤动物模型的报道，因此人们亟需一种具有宫内起源的、稳定可靠、便捷的动物模型，这对于胎源性成年胆汁淤积性肝损伤的机制及防治药物的研究具有重要意义。

越来越多的研究证实，糖皮质激素是决定胎儿成熟和出生后命运的关键，宫内糖皮质激素过暴露可编程胎儿多疾病易感。地塞米松为合成类糖皮质激素，在临床上可促进胎儿肺成熟、减少新生儿呼吸窘迫综合征发生并降低围产儿死亡率，因此被广泛用于早产相关妊娠疾病。世界卫生组织对29个国家359个机构的母婴健康调查资料显示，各国对孕22-36周早产儿出生前使用合成类糖皮质激素预防性治疗率平均为54％，其中我国的使用率为68％，某些国家使用率最高可达91％。然而，孕期应用地塞米松具有“双刃剑”效应。流行病学和基础研究发现，孕期应用地塞米松不仅会降低子代出生体重，还可引起子代肝脏多种疾病的发生，母亲分娩前接受地塞米松治疗后的婴儿胆酸合成速率增加。我们近期发现，孕期地塞米松暴露可引起成年子代大鼠胆汁淤积性肝损伤的发生。

发明内容