[发明专利]一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，通过在培养间充质干细胞(MSC)时添加当归提取物，能促进MSC外泌体的释放，获得的外泌体具有更强的促血管内皮细胞增殖的能力，可用于机体损伤类血管新生的修复治疗；该发明方法简便易行，适用于不同来源的干细胞外泌体的大规模生产，为干细胞外泌体应用于医学转化事业提供一条新的路径；本发明公开了一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，工艺设计合理，可行性高，且可产业化和衍生化，适用于制备不同来源的间充质干细胞的“血管修复外泌体”，同时可将干细胞外泌体应用于其他机体损伤的血管修复治疗，具有较优异的治疗效果。

技术领域

本发明涉及生物干细胞技术领域，具体是一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。

近年来国内外大量的基础和临床研究证实间充质干细胞可以迁移到伤口组织、分泌血管内皮生长因子等促进新生血管形成、刺激角质形成细胞参与表皮再形成，进而促进糖尿病足溃疡的愈合、改善临床症状，其原因是因为间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、角质细胞生长因子(KGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板样衍生生长因子(PDGF)、纤维连接蛋白(FN)等。

其中，成纤维细胞生长因子(FGF)是一类来源于中胚层和神经外胚层的细胞分泌的具有重要生物活性的细胞生长因子，也是一类重要的促有丝分裂因子和促细胞分化的诱导因子。有关研究表明，FGF能促进组织和神经修复、再生及伤口愈合和新生血管生成等多种生理作用；FGF是现如今体内发现的最有效的血管生成因子之一，其在毛细管基底膜降解、内皮细胞迁移增生、胶原合成等新生血管生成过程中具有明显的促进作用。

角质细胞生长因子(KGF)属于成纤维细胞生长因子(FGFs)家族的成员之一，又称FGF-7，主要由间质细胞产生，KGF与上皮细胞上的受体KGFR特异性结合来参与调控信号传递级联反应，参与组织器官发育和细胞生长增殖等多种生物过程，改善皮肤微循环及促进血管扩张，促进创伤愈合，并且在促进毛发再生也起到重要作用。但是，干细胞分泌的因子都属于大分子蛋白类，其被皮肤和毛囊前体细胞吸收的比例率差。

针对上述情况，我们公开了一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，这是我们亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，以解决现有技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：

1)间充质干细胞的制备；

2)将步骤1)得到的间充质干细胞接种于培养板中，无血清培养；

3)在培养基中加入当归提取物，继续培养并收集细胞培养上清液；

4)超速离心，得到所述干细胞外泌体。

较优化地，包括以下步骤：

1)间充质干细胞的制备；步骤1)中进行间充质干细胞的制备，间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、角质细胞生长因子(KGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板样衍生生长因子(PDGF)、纤维连接蛋白(FN)等；

2)取步骤1)制备的间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶进行常规消化、收集细胞悬液；