[发明专利]一株用于低温污水脱氮的异养硝化细菌及其应用

权利要求书

1.一株低温异养硝化细菌，经经16S rDNA分子鉴定为Acinetobacter johnsoniistrain，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年10月25日，保藏编号为CGMCC No.18736。

2.按照权利要求1所述的一株低温异养硝化细菌，从冬季污水处理厂生物转盘泥样中分离、筛选纯化得到。

3.按照权利要求2所述的一株低温异养硝化细菌，所述低温异养硝化细菌的筛选方法为：取适量生物转盘泥样加入到装有无菌水的锥形瓶中，放于摇床上震荡3h后，用移液枪吸取液体接种于已灭菌的富集培养基中，于13℃，150rpm条件下培养5d；再取富集培养液转接于新的富集培养基中，转接3次，共富集15天；

取富集培养液接入装有无菌水的试管中，按倍比进行稀释，分别得到菌种浓度为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度的细菌悬浮液；然后采用平板涂布法，分别从各梯度细菌悬浮液中吸取部分涂布于异养硝化培养基上，置于13℃恒温培养箱中培养，分别挑取不同形态的菌落进行划线分离，分离纯化3次以上直至菌落特征基本一致，然后接种于斜面培养基上并保存于4℃冰箱；

上述所述富集培养基：氯化铵(NH₄Cl)0.5g，乙酸钠(CH₃COONa)3.5g，硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.05g，磷酸氢二钾(K₂HPO₄·3H₂O)0.2g，氯化钠(NaCl)0.12g，硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.01g，硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)0.01g，蒸馏水1000mL，pH值7.0-7.4；若需固体培养基，则加入琼脂；

异养硝化培养基：氯化铵(NH4Cl)0.382g，乙酸钠(CH3CO0Na)2.0g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.05g，磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)0.2g，氯化钠(NaCl)0.12g，硫酸锰(MnSO4·H2O)0.01g，硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)0.01g，蒸馏水1000mL，pH值7.0-7.4；若需固体培养基，则加入琼脂；

将初筛所得的18株菌株在活化培养基中培养至对数生长期，接种于异养硝化培养基中，在13℃，150rpm下培养5天后，取样离心测量氨氮去除率，可得所述的菌株BC-15，作为后续研究的目的菌株；

上述活化培养基：胰蛋白胨5g，酵母浸粉5g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH值7.0-7.4。

4.按照权利要求1所述的一株低温异养硝化细菌，其基因列表见SED ID NO:1。

5.按照权利要求1所述的一株低温异养硝化细菌的应用，用于低温污水脱氮处理。

6.按照权利要求5所述的一株低温异养硝化细菌的应用，在13℃条件下对以NH₄⁺-N为氮源的富营养水体进行脱氮处理。

7.按照权利要求5所述的一株低温异养硝化细菌的应用，将低温硝化菌扩大培养后按3％的比例投入含氨态氮的水体中。