[发明专利]一种烟气体液代谢糖苷衍生物集成化样品处理系统及应用

说明书

本发明涉及一种烟气体液代谢糖苷衍生物集成化样品处理系统，是一种集糖苷衍生物在线去糖基化，富集和分离的系统，包括：一体式自动进样‑馏分收集器，液相色谱泵，切换阀，糖苷酶固定化酶反应器，色谱柱和检测器。首先将样品送入糖苷酶固定化酶反应器中进行在线去糖基化处理，再通过色谱柱进行富集和分离，以确定洗脱产物的保留时间，再将产物收集下来，最终进行分析。本发明优点是将体液中糖苷衍生物的复杂样品预处理过程进行了集成化。省去复杂的样品处理步骤，缩短了样品预处理时间，减少了样品在离线处理过程中样品丢失和污染等问题；与分离鉴定平台显示出良好的兼容性，因此，在糖苷类衍生物或代谢物的分析中具有较好的实用性。

技术领域

本发明涉及一种烟气体液代谢糖苷衍生物集成化样品处理系统，是一种集糖苷衍生物的自动进样、在线去糖基化酶解、酶解产物在线富集、分离和检测以及洗脱馏分自动收集的样品预处理系统。

背景技术

体内代谢产物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1-丁酮(NNAL)和可替宁(Cotinine)是烟草制品中非常重要的化合物，是尼古丁亚硝基化或烟碱亚硝基化等形成的烟气致癌物。目前，对人体体液中NNAL和Cotinine代谢物的研究主要是对其糖苷化衍生物NNAL-O-Glu和Cotinine-O-Glu)的分析。目前，NNAL-O-Glu和Cotinine-O-Glu的前处理方法主要是通过水解法去糖基化，从而得到游离的NNAL和Cotinine。该过程可以通过酶水解方式进行，其中通过β-葡萄糖醛酸酶水解的方式应用较多。但传统的自由溶液酶水解反应耗时较长、水解效率较低，制约烟气体内代谢物的快速分析。最近，王婷等人制备了一种β-葡萄糖醛酸酶固定化酶反应器，可在几分钟内实现糖苷化衍生物的水解(色谱，2018，36，245-252)。然而，上述过程仍然需要多步的手工操作，无法实现自动化处理，制约着样品分析的通量。

针对上述问题，我们发展了一种集集糖苷衍生物的自动进样、在线去糖基化酶解、酶解产物的在线富集、分离和检测以及洗脱馏分自动收集的样品预处理系统。该系统可以实现高通量、低损失的糖苷化衍生物样品预处理，在体内代谢物糖苷衍生物的高通量分析中具有很好的应用前景。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种集糖苷衍生物的自动进样、在线去糖基化酶解、酶解产物的在线富集、分离和检测以及洗脱馏分自动收集的样品预处理系统。该系统可以直接处理体液中的糖苷类衍生物，不需要复杂和繁琐的手工操作，同时整个处理过程保持高度的连续性和高通量性。

为了实现该目的，本发明的技术方案是：

1、采用糖苷酶酶反应器进行在线去糖基化处理，酶反应器采用柱形式的酶反应器，酶活高，同时耐压性好，采用的固载材料为有机基质的整体材料、有机-无机的整体材料、有机基质的颗粒材料或硅胶基质的颗粒材料中的1种或2种。固载的酶为N-糖酰胺酶F或β-葡萄糖醛酸酶；酶解温度可为25-40℃；

2、酶解产物采用色谱柱进行富集和分离，色谱柱可为离子交换色谱柱、反相色谱柱或离子交换-反相混合型色谱柱；

3、采用梯度洗脱方式分离酶解产物，通过检测器信号确定洗脱产物的保留时间，检测器可为紫外检测器、荧光检测器或示差折光检测器。

4、最后通过一体化自动进样-馏分收集器将产物收集下来，通过冻干和复溶后，产物通过质谱直接检测或通过液质联用系统进行分析。

本发明具有如下优点：

1、样品手工操作步骤减少，从而样品损失、污染的可能性也将降低。

2、由于不需要离线酶解，系统的分析通量大大提高

3、系统集成化、自动化程度高

4、可以与分离鉴定技术在线联用，为实现体液中糖苷类衍生代谢物的高通量分析提供技术支撑。

附图说明