[发明专利]检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法

说明书

本发明公开了一种检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法，采用溶剂热法制备了锰掺杂的镍基金属骨架化合物Mn‑MOF，滴涂在玻碳电极GCE表面，再滴涂亚甲基蓝末端标记单链核酸适体MB‑DNA，构筑MB‑DNA/Mn‑MOF/GCE传感界面。加入应激诱导磷蛋白STIP1，MB‑DNA适体与STIP1特异性结合，形成MB‑DNA/STIP1复合物，使MB‑DNA脱离GCE表面，引起MB氧化电流峰强度减弱。拟合MB电流峰强度与STIP1浓度之间的线性关系，构建检测STIP1的纳米电化学适体传感器。本发明方法操作便捷、灵敏度高、特异性好，可作为一种新的方法用于STIP1的定量检测。

技术领域

本发明属于功能纳米复合材料和电化学适体传感器的制备技术领域，具体涉及一种检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法，其制备的传感器可用于生物医学样品中应激诱导磷蛋白的高灵敏和高选择性检测。

背景技术

应激诱导磷蛋白(STIP1)是由卵巢癌组织分泌到患者外周血中的一种蛋白，检测STIP1有助于提高卵巢癌的早期诊断水平。近年来，有关STIP1作为潜在肿瘤标志物用于检测人体卵巢癌的研究被陆续报道。Huang等制备了基于金纳米颗粒的杂化纳米复合物调控的荧光开-关，用于检测人源STIP1(Yue Huang,Hao Li,Lei Wang,Xiaoxia Mao,Genxi Li,Highly sensitive protein detection based on smart hybrid nanocomposite-controlled switch ofDNA polymerase activity,ACS AppliedMaterialsInterfaces,2016,8,28202-28207)；Chen等制备了基于还原氧化石墨烯的双功能传感界面，用于STIP1的荧光和拉曼散射光检测(Feng Chen,Yi Liu,Chunyan Chen,Hang Gong,Changqun Cai,Xiaoming Chen,Respective and simultaneous detection tumor markers CA125 andSTIP1 using aptamer-based fluorescent and RLS sensors,Sensors and ActuatorsB:Chemical,2017,245,470–476)；朱蒂·万德瓦特等将来自母体的生物样品与生物标志物STIP1抗体相结合，开发了一种用于预防或降低胎儿或儿童自闭症谱系障碍发生风险的方法(朱蒂·万德瓦特；丹尼尔·布劳恩施魏格,诊断和治疗自闭症的方法,专利公开号CN105911275A)。当前，有关STIP1定量检测的文献报道较少，且报道的检测方法依然存在某些挑战，难以在实际样品中实现简单、快速、高灵敏和高选择性检测STIP1的目标。

基于此，本发明公开了一种检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法。首先制备锰掺杂镍基金属骨架化合物(Mn-MOF)，将其乙醇分散液滴涂到洁净的玻碳电极(GCE)表面，孵育一段时间后自然干燥；然后将亚甲基蓝末端标记单链核酸适体(MB-DNA)的水溶液滴涂至Mn-MOF/GCE表面，孵育一段时间后自然干燥；最后将表面修饰的GCE插入电解槽中，以磷酸盐水为电解质溶液，并向其中加入一定量STIP1，孵育一段时间。由于MB-DNA适体与STIP1之间特异性结合形成MB-DNA/STIP1复合物，使MB-DNA脱离GCE表面，引起MB氧化还原作用降低，即电流峰强度减弱。通过拟合MB电流峰强度与外加的STIP1浓度之间的线性关系，即可构建检测STIP1的纳米电化学适体传感器。截止目前，尚未检索到有关MB-DNA/Mn-MOF纳米复合物，以及基于该复合物构建纳米电化学适体传感器用于STIP1定量检测的国内外文献和专利报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术存在的问题，设计一种操作便捷、灵敏度高、特异性好的应激诱导磷蛋白检测的新方法。

为实现上述目的，本发明涉及的一种检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法，其具体制备方法包括以下步骤：