[发明专利]检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法

权利要求书

1.一种检测应激诱导磷蛋白的纳米电化学适体传感器的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)锰掺杂镍基金属骨架化合物Mn-MOF的制备：将0.465g Ni(NO₃)₂·6H₂O和0.01g Mn(NO₃)₂·4H₂O溶于25mL二甲基甲酰胺DMF中，搅拌30min后形成溶液A；将0.133g 1,4-苯二甲酸溶于25mL DMF中，搅拌30min后形成溶液B；在磁力搅拌下，将溶液B缓慢加入溶液A中，然后逐滴加入稀盐酸得到绿色溶液，将其转入高压反应釜中，在180℃下搅拌反应24h；反应产物经离心处理得到沉淀物，采用DMF和乙醇洗涤3次，产物自然干燥；

(2)亚甲基蓝末端标记单链核酸适体/锰掺杂镍基金属骨架化合物/玻碳电极MB-DNA/Mn-MOF/GCE传感界面的构筑：在洁净的玻碳电极GCE表面滴涂5μL质量浓度为5％的Nafion溶液，孵育5min后滴涂Mn-MOF水分散液，其中Mn-MOF浓度为0.1～1mg/mL，滴涂用量为5～50μL；将摩尔浓度为2μM的MB-DNA在37℃下孵育2h，量取5～25μL滴涂在Mn-MOF/GCE表面，孵育12h后用N₂吹干，然后用二次蒸馏水和乙醇淋洗3次，产物自然干燥，得到表面修饰GCE；

(3)将MB-DNA/Mn-MOF/GCE作为工作电极插入电解槽中，加入pH为7.4的0.1M磷酸盐水缓冲液作为电解液，向其中加入应激诱导磷蛋白STIP1，STIP1在此电解液中的浓度为0～500ng/mL；采用含有三电极系统的CHI 660E电化学工作站测定不同STIP1浓度C_STIP1存在下的电化学方波伏安曲线，通过拟合亚甲基蓝的氧化电流峰强度I_MB与C_STIP1之间的线性关系，构建用于STIP1定量检测的纳米电化学适体传感器；STIP1浓度的线性检测范围为1～500ng/mL，检测限为1～10ng/mL。