[发明专利]一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法

说明书

本发明公开了一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法，属于植物组培技术领域。本发明所提供的方法具体为：以DCR为基本培养基，附加有浓度不超过8mg/L的水杨酸作为杉木体胚诱导培养基；通过杉木未成熟球果获得未成熟种胚，将其放在在愈伤诱导培养基上培养25～30天获得杉木胚性胚柄团；将所得杉木胚性胚柄团放入杉木体胚诱导培养基中，于培养箱中进行暗培养，诱导促进杉木体胚发生，23℃条件下，培养60～100天，即可得到比对照数目最高可达2倍以上的体胚，大大提高了杉木体胚的诱导效率，具有很好的实用性。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，更具体地说，涉及一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法。

背景技术

杉木(Cunninghina lanceolata)隶属于杉科杉木属，是我国重要用材树种之一，其生长快、干形通直圆满，材质轻软细致，易加工，纹理美观，有特殊香气，不翘不裂，抗蛀耐腐，是建筑、家具、桥梁、造船、造纸及木纤维等工业的优良原材料。目前，主要通过三种途径繁殖杉木种苗：种子、扦插和传统组织培养[温亚锋.基于未成熟合子胚的杉木胚性组织诱导和继代的研究[D].福建农林大学，2011.]，但是良种种子产量、种子播种品质不稳定，第2代以上高级良种供应不足，且种子播种品质差，尤其是种子涩粒多，通常占重量的40％～60％[郑仁华.杉木遗传育种研究进展与对策[J].世界林业研究，2005(03)：63-65.]；而扦插育苗则受到母树穗条的多少、场地空间及生根率等方面的限制，其规模很难满足现代林业生产对杉木种苗的大量需求；此外，传统的组织培养根的诱导较为困难，诱导出的根数量少且弱，在一定程度上影响了苗木质量和造林的成功率。因此建立高效率的杉木未成熟胚的胚胎发生体系，有利于加快杉木速生优苗的产业化发展。

体细胞胚发生属于无性繁殖技术，生产出的种苗遗传背景差异小，苗木整齐。与扦插和传统组织培养相比，其规模更大、成本更低。然而，作为裸子植物的杉木，体胚的发生与被子植物的体细胞胚发生有着完全不同的途径和机理，成熟的种子以及由种子发育而来的植株，营养细胞转变为胚性细胞十分困难。但在针叶树种中，雌配子体受精后发育成种子的过程中有一部分珠心细胞处于未分化的阶段，在适当的培养条件下，可以利用裂生多胚特性，诱导体胚形成。Gupta等(1985，1995)报道过利用这一生物学特性，诱导出花旗松(Pseudotsuga menziesii)和湿地松(Pinuselliottii)的体胚，其大致可以分为四个步骤：胚性胚柄细胞团(ESM：Embryogenesissuspensor mass)的诱导、保持和增殖、体胚的成熟、萌发和植株再生，并证明该技术体系具有达到产业化的前景。

然而，目前虽有采用杉木未成熟胚诱导体胚发生的报道，但是只能在外植体上形成个别体细胞胚，存在诱导率低、数量少的问题，难以在生产上应用。因此建立高效率的杉木未成熟胚的胚胎发生体系，有利于加快杉木速生优苗的产业化发展。已有研究表明水杨酸对不同植物的体胚发生具有不同的效果，其中的机理还待进一步探索，但目前未见将其应用于杉木体胚发生的报导。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法，能够提高杉木体胚诱导效率。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法：取杉木胚性胚柄团加入体胚诱导培养基中，于培养箱中进行暗培养，诱导促进杉木体胚发生；其中，体胚诱导培养基：以DCR为基本培养基，附加有浓度不超过8mg/L的水杨酸。

所述的体胚诱导培养基还包括：1mg/L VC，0.45g/L谷氨酰胺，0.5g/L水解酪蛋白，2～4g/L Ac，2.8g/L水晶洋菜，0.2g/L天冬酰胺，0.2g/L脯氨酸，100～200g/L PEG，1～5mg/L GA，2～8mg/LABA。

所述的水杨酸，其浓度为2～8mg/L。

所述的水杨酸，其浓度为6mg/L。