[发明专利]一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法

权利要求书

1.一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）比对标准的建立：将10 μL 、37.5 μM HT9 DNA核酸模板序列与50 μL 不同浓度甲基汞标准溶液混匀后，室温下放置5分钟；然后分别加入5 μL 25 mM 硼氢化钠溶液，充分混匀后，室温静置20 分钟制得纳米晶种；再分别加入5 μL 浓度为200 mM 的盐酸羟胺溶液和50 μL浓度为 1.0 mM氯金酸溶液，充分混匀1分钟后，记录混合溶液的颜色变化；与不同甲基汞浓度一一对应，建立标准色卡；同时，利用酶标仪测定溶液的吸光度，与甲基汞浓度对应，建立标准工作曲线；

（2）取50 μL 经0.22 μm 滤膜过滤的海产品提取液，替换步骤（1）中的甲基汞标准溶液，按相同的步骤操作，观察混合溶液的颜色变化，并与步骤（1）所建立的标准色卡比对，实现甲基汞的半定量检测；通过酶标仪测定混合溶液吸光度代入标准工作曲线，计算甲基汞的含量，从而实现对海产品提取液中甲基汞含量的检测；

步骤(1)所述200 mM 的盐酸羟胺溶液的溶剂为纯水；所述1.0 mM 氯金酸溶液的溶剂为pH 8.0的10 mM Tris-HNO₃；所述25 mM 硼氢化钠溶液的溶剂为冰水，现配现用；

步骤(1)所述HT9 DNA核酸模板序列为：5’-TTGTTCTTTGTTAAAAATTCTTTGTTCTT-3’。

2.根据权利要求1所述一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法，其特征在：步骤(1)所述甲基汞标准溶液浓度范围为0.05 -4.0 μM。

3.根据权利要求1所述一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法，其特征在：步骤(1)所述甲基汞标准溶液为甲基汞溶于pH值为 7.0 的Tris-HCl 缓冲液中制备而成。

4.根据权利要求1所述一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法，其特征在：步骤（2）所述海产品提取液的制备方法为：海产品清洗干净，打碎，均质；准确称取5.0 g均质样品，加入500 ng/g甲基汞标准溶液对匀质样品进行加标，然后放入聚四氟乙烯消解瓶中，加入20 mL 1mol /L 盐酸溶液，盖紧后放入微波消解器中，微波系统功率为400w，70 ℃加热5min进行提取，将提取物冷却至室温后，移出上清液，再加入20 mL 1mol /L 盐酸溶液以同样方式重复提取残留物1次，合并两次上清液，从中取1 mL上清液，用0.22μm滤膜过滤后加入3 kDa 超滤管中，10000 rpm 离心5分钟，从收集管中的滤液中取400 μL，用真空离心浓缩仪浓缩至干，加入50 μLTris-HCl缓冲液充分溶解，制得海产品提取液。

5.如权利要求1所述的一种基于DNA调控金-汞合金生长的甲基汞可视化检测方法在甲基汞检测中的应用。