[发明专利]具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分的制备方法

权利要求书

1.一种具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、通过高效液相色谱仪，以甲醇或乙腈为有机相A相，0.1%甲酸水为水相B相，通过液相色谱的双泵调整A相和B相至流动相为甲醇-0.1%甲酸水混合物，其中甲醇含量范围在5%-45%之间，或流动相为乙腈-0.1%甲酸水混合物，其中乙腈含量在5%-30%之间，流速控制为2.4 mL/min，柱温室温，平衡反相C18色谱柱，长度250 mm，内径10 mm，填充物粒径10 μm，平衡至基线水平；

b、分别称取500 mg，750 mg，1000 mg，1500 mg的石榴皮提取物大孔树脂纯化物，均溶于水中配制成浓度为500 mg/mL的溶液，离心去除悬浮在其中的沉淀，至于温度4℃冰箱中放置15小时，将样品分别进样至步骤a中平衡好的色谱柱中，进样后即开始接取组分，将所得组分溶液按每分钟一个的速率接在容器里，转移至液相小瓶中待测，从0 min-40 min的区间里，共计接取40个组分；

c、使用高效液相色谱仪，配以紫外检测器和分析型反相C18色谱柱，长度250 mm，内径4.6 mm，填充物粒径10 μm，柱温室温，流速1.0 mL/min，监测波长254 nm，对步骤b所得各组分样品，进样体积5微升，记下各样品中安石榴苷的峰面积A及所有峰的总面积A₀，以接下的各组分的序号数（x）为横坐标，对应各组分安石榴苷和前杂质的占比为纵坐标，在同一张图上做η（%）-x和α（%）-x图；

d、将步骤b中上样量为500 mg时所得的一系列组分，合并0 min至40 min之间的组分，于温度50℃浓缩至5 mL，真空冷冻干燥得到组分1；或上样量为750 mg所得的一系列组分，合并0 min至40 min之间的组分，于温度50℃浓缩至5 mL，真空冷冻干燥得到组分2；或上样量为1000 mg所得的一系列组分，合并0 min至40 min之间的组分，于温度50℃浓缩至5 mL，真空冷冻干燥得到组分3；或上样量为1500 mg所得的一系列组分，合并0 min至40 min之间的组分，于温度50℃浓缩至5 mL，真空冷冻干燥得到组分4，即得到具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分。

2.如权利要求1所述的一种具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分的制备方法，其特征在于步骤a中使用的流动相为甲醇-0.1%甲酸水混合溶液，甲醇含量在10%-30%之间；或流动相为乙腈-0.1%甲酸水混合溶液，乙腈含量在6%-20%之间。

3.如权利要求1所述的一种具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分的制备方法，其特征在于步骤d中上样量为500 mg时所得的一系列组分，合并11 min至30min之间的组分；或上样量为750 mg时所得的一系列组分，合并9 min至26 min之间的组分；或上样量为1000 mg所得的一系列组分，合并8 min至22 min之间的组分；或上样量为1500mg时所得的一系列组分，合并8 min至17 min之间的组分。

4.如权利要求1所述的一种具有强抗氧化及金黄色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效组分的制备方法，其特征在于对于C18色谱柱，上样量范围在石榴皮大孔树脂纯化物与所用C18填料质量比为250-1250 mg/g之间。