[发明专利]CTLA-4 Aptamer靶向共负载PD-1 siRNA纳米颗粒及其制备和应用

权利要求书

1.一种CTLA-4Aptamer靶向共负载PD-1siRNA的纳米颗粒，其特征在于，包括纳米载体和负载于其上的活性成分，所述活性成分包括CTLA-4Aptamer和PD-1siRNA；所述CTLA-4Aptamer通过吸附或化学键连接分布于所述纳米载体的表层；所述PD-1siRNA通过包载分布于所述纳米载体的内部和/或通过吸附分布于所述纳米载体的表层。

2.根据权利要求1所述的CTLA-4Aptamer靶向共负载PD-1siRNA的纳米颗粒，其特征在于，所述纳米载体由生物可吸收的聚合物与阳离子脂质(DOTAP)或其修饰物构成或由生物可吸收的聚合物、磷脂类化合物构成；所述磷脂类化合物为二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)或其修饰物、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)或其修饰物、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)或其修饰物、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE)或其修饰物、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(DLPE)或其修饰物中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的CTLA-4Aptamer靶向共负载PD-1siRNA的纳米颗粒，其特征在于，所述生物可吸收的聚合物为PLGA、PLGA-S-S-PEG、PLGA-PEG、PCL-PEG、PCL-S-S-PEG中的至少一种。

4.权利要求1-3任意一项所述的CTLA-4Aptamer靶向共负载PD-1siRNA的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括步骤：

将生物可吸收的聚合物与DOTAP或其修饰物混合得到杂化薄膜，然后水化，超声得到杂化纳米粒混悬液，将PD-1siRNA和二级结构处理后的CTLA-4Aptamer混匀，加入所述杂化纳米粒混悬液，振荡，得到表层负载有PD-1siRNA和CTLA-4Aptamer的杂化纳米颗粒；或

先使磷脂类化合物与CTLA-4Aptamer反应通过化学键连接，再与PD-1siRNA、生物可吸收的聚合物混合，制备纳米颗粒，得到表层负载CTLA-4Aptamer、内部负载PD-1siRNA的纳米颗粒。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，对CTLA-4Aptamer进行二级结构处理的操作包括：将CTLA-4Aptamer溶于DEPC水，在90-100℃下加热5-10min，缓慢降至室温，得到二级结构处理后的CTLA-4Aptamer。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述生物可吸收的聚合物为PLGA-S-S-PEG或PLGA-PEG；

杂化纳米粒混悬液的具体操作为：将PLGA-S-S-PEG或PLGA-PEG与DOTAP用溶剂溶解并蒸发溶剂得到混合物薄膜，然后用DEPC水在60℃下水化处理30-60min，在冰浴条件下超声3-10min。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述生物可吸收的聚合物为PLGA-S-S-PEG或PLGA-PEG；

所述PLGA-S-S-PEG或PLGA-PEG与DOTAP或其修饰物的质量比为2-10：1；DOTAP或其修饰物与CTLA-4Aptamer的质量比为2-10：1；N/P比为3:1以上。

8.权利要求1-3任意一项所述的CTLA-4Aptamer靶向共负载PD-1siRNA的纳米颗粒在制备抗肿瘤或抗癌药物中的应用。