[发明专利]一种基于紫外线照射的细胞损伤模型制备方法

说明书

本发明公开了一种基于紫外线照射的细胞损伤模型制备方法，所述方法包括以下步骤：切取临床手术中的人体正常皮肤组织，通过碘伏进行消毒，消毒完成后，使用0.25％胰蛋白酶消化液消化皮肤组织，将组织分散成单个细胞，然后将细胞液放在适宜的培养基中，将培养基放置在培养箱中培养，让这些原代细胞生长和增殖；原代细胞24小时左右后贴壁长满培养基，然后再用0.25％胰蛋白酶消化液消化，换上新的培养基并接种到多个六孔板上，六孔板上的接种密度约为5X10⁴/ml。本发明通过选取正常人体组织，成功进行体外培养，并获得较高纯度的人体正常细胞，使得制得的细胞损伤模型更接近于人类皮肤经紫外线照射后的状态，从而得到的实验数据能更加准确。

技术领域

本发明涉及细胞实验技术领域，具体为一种基于紫外线照射的细胞损伤模型制备方法。

背景技术

紫外线是一种低能量的电磁辐射，具有多种生物学效应，如杀菌、致炎症、致癌等作用，职业性和生活性接触一定量的紫外辐射可导致人体神经内分泌系统失调，免疫功能下降等，皮肤像人类其他器官一样，随时间而衰老，但又不同于其他器官，影响皮肤衰老的一项重要的环境因素是紫外线辐射，随着大气臭氧空洞的增加、环境光污染的加重及人们生活水平的提高，大家越来越注重皮肤因光损伤导致的红斑、皱纹、色沉、弹性减弱等问题，有关光老化的实验大多建立在光老化实验动物模型的基础上，因此，建立一个可靠的更接近于人类皮肤的细胞模型具有重要意义，但是现有的细胞损伤模型制备方法制备的模型与人类皮肤细胞模型相差较大，制备成功率低，因此有必要对现有技术进行改进，以解决上述问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明的目的在于提供一种基于紫外线照射的细胞损伤模型制备方法，以解决上述背景技术中提出的现有的细胞损伤模型制备方法制备的模型与人类皮肤细胞模型相差较大，制备成功率低的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于紫外线照射的细胞损伤模型制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1：切取临床手术中的人体正常皮肤组织，通过碘伏进行消毒，消毒完成后，使用0.25％胰蛋白酶消化液消化皮肤组织，将组织分散成单个细胞，然后将细胞液放在适宜的培养基中，将培养基放置在培养箱中培养，让这些原代细胞生长和增殖；

S2：原代细胞24小时左右后贴壁长满培养基，然后再用0.25％胰蛋白酶消化液消化，换上新的培养基并接种到多个六孔板上，六孔板上的接种密度约为5X10⁴/ml，接种后的各个六孔板放入培养箱中培养直至贴壁，再更换新的培养基，用于进一步实验，将多个六孔板分为正常对照组，以及各个照射时间段的实验组；

S3：将六孔板放置在超净台上，超净台里面设置紫外灯，紫外灯先预热15min，使光源发出的光强度稳定，将已经接种的六孔板置于紫外灯下，通过紫外灯对六孔板进行照射，根据照射时间的不同得到不同的细胞损伤模型。

优选的，所述S1中的人体正常皮肤组织为包皮环切术中切出的正常皮肤组织或美容皮肤切除手术中切出的正常皮肤组织。

优选的，所述S1中培养箱内细胞的生存环境设置为37摄氏度、5％CO₂和PH7.2-7.4。

优选的，所述S1和S2中培养基的配制方法设置为：超净工作台内取一定量的MEM-α基础培养基于无菌、干净的瓶内，加入50U/ml青霉素、100U/ml链霉素、血清、三蒸水、表皮生长因子，并通过盐酸调节PH至7.2-7.4，通过磁力搅拌器搅拌均匀，0.22um过滤器过滤后转移至新的瓶内，4摄氏度冰箱保存备用。

优选的，所述S3中紫外灯发出的紫外线设置为UVA、UVB或UVC波段，且紫外灯距离六孔板的垂直距离为25cm，紫外灯的照射强度通过辐照计测得，紫外线波段、照射强度和照射时间均记录在标签上，贴在得到的细胞损伤模型上。