[发明专利]游离前列腺特异性抗原检测试剂盒及其制备方法

说明书

本申请涉及一种游离前列腺特异性抗原检测试剂盒及其制备方法。试剂盒包括第一试剂、第二试剂，可选地还包括质控品和/或校准品。第一试剂包含表面活性剂和缓冲液，第二试剂包含包被有抗体的纳米颗粒和缓冲液。该试剂盒利用样本中的游离前列腺特异性抗原与第二试剂中的抗体反应。样本中游离前列腺特异性抗原浓度越高，抗体与包被有抗体的纳米颗粒反应产生的浊度变化越大，由此可建立校准曲线，从而定量测定未知样本中游离前列腺特异性抗原浓度。

技术领域

本申请属于临床体外诊断、医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂。更进一步地，本申请涉及一种fPSA检测试剂盒。

背景技术

人前列腺特异抗原(Prostate Specific Antigen，以下简称PSA)是由前列腺腺泡和导管的上皮细胞分泌的一种单链糖蛋白，分子量约34KD。PSA在功能上属于类激肽释放酶的一种丝氨酸蛋白酶，参与精液的液化过程，是临床常规用于前列腺良性与恶性疾病的诊断、鉴别、前列腺癌患者术后随访的重要指标。

正常生理情况下，PSA通过导管分泌到精液中。PSA在精液中的浓度高于在血清中浓度的100万倍。在前列腺的腺泡、导管腔与血液循环系统之间，存在着明显的组织屏障。当患有前列腺疾病时，组织屏障就会受到不同程度的破坏。特别是患有前列腺癌时，由于肿瘤细胞的异常生长会使这一自然屏障遭受严重破坏，PSA就会大量渗漏于血中，造成血清PSA水平的大幅度升高。

研究证明，血循环中PSA以两种形式存在：结合型PSA(cPSA)大约占85％以上，游离型PSA(即fPSA)占15％左右，两者之和为总PSA(tPSA)。

临床中，通常把tPSA4ng/ml作为筛选前列腺癌的临界值；把tPSA结果在4至10ng/ml之间称为灰色区域，前列腺癌与前列腺增生均有可能；而当tPSA10ng/ml时，前列腺癌可能性极大。

对于fPSA/tPSA比值，各文献报道不一致。有些以0.16为临界值，也有以0.19或0.25为临界值。当血清tPSA在灰色区域时，fPSA/tPSA显得非常重要，fPSA/tPSA大于临界值时，前列腺癌的可能性小，当fPSA/tPSA值小于临界值时，前列腺癌的可能性较大。

随着医疗专业人员和患者意识到fPSA在诊断前列腺癌的潜在价值，实验室检验量激增，需要本领域提供更快、更准、更有效的检测方法，帮助医生和患者更早的得到检测结果。

目前fPSA通常用免疫学方法进行测定。常用检测方法有：

(1)化学发光免疫定量检测，本法采用全自动控制系统，以吖啶酯标记法，微磁性颗粒PSA结合的固相试剂和单抗PSA液相试剂，直接发光进行定量检测的技术。该技术灵敏度高、特异性强，但仪器、试剂昂贵，无法基层筛查；

(2)酶标测定法(EIA)，通常采用双抗夹心法对f-PSA、c-PSA、t-PSA进行测定。所采用的抗体为针对PSA上不同表位的单克隆抗体，采用的单克隆抗体不同，可以检测PSA的不同形式。该法缺点是重复性差，对操作人员素质要求较高；

(3)放射免疫测定法(RIA)，存在环境污染问题；

(4)金标记分析，该法具有使用方便、结果易读、反应迅速等优点，但准确性较差。

本申请所要解决的问题是克服上述现有试剂所存在的缺陷，提供一种新的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，检测样本中(例如血清或血浆)fPSA的含量，提高检测速度、降低操作复杂性、尽快得到可靠结果。

发明内容

根据本申请的一方面，提供了一种检测试剂，其包含第一抗体和第二抗体；所述第一抗体为抗-抗原抗体；所述第二抗体为抗-复合物抗体；并且所述第二抗体不单独结合所述的抗原，所述复合物是所述第一抗体和所述抗原形成的复合物。

在一些实施方案中，所述抗原是人fPSA。