[发明专利]一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型

权利要求书

1.一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型，其特征在于：基于无标记细胞整合药理学技术，利用稳定表达α2A的细胞系HEK-293-α2A，借助于已知的激动剂和拮抗剂，建立α2A受体的细胞筛选模型；

根据待测样品的DMR信号谱与已知激动剂和拮抗剂的DMR特征信号谱的相似性，判断待测样品的激动活性、拮抗活性或者下游通路的调节影响；

建立过程为：

1）在Epic® 384孔生物感应器微型板中接种HEK-293-α2A细胞，接种的细胞密度为2.0~ 2.5 × 10⁴个/孔，细胞培养液体积为40 µL/孔，接种后细胞培养时间为18 ~ 24 h；

2）将无选择性肾上腺素受体激动剂肾上腺素以浓度为1.2 ~ 10000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

3）将选择性α2A肾上腺素受体激动剂Guanfacine以浓度为1.2 ~ 10000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

4）将选择性α2A受体拮抗剂BRL44408以浓度为0.2 ~ 25000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

5）获得的所有DMR特征信号谱具有浓度-响应依赖关系。

2.根据权利要求1所述一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品具有激动活性的筛选步骤如下：

1）将肾上腺素或Guanfacine以浓度为1.2 ~ 10000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

2）将待测样品以0.01 nM ~ 100 µM加入到接种HEK-293-α2A细胞的微孔板中，检测其DMR信号谱；

3）关联分析步骤1）和步骤2）中的DMR信号谱，若步骤2）的DMR信号谱与1）中的DMR特征谱没有相似性，则样品没有激动活性；若具有轮廓相似性，则进行下一步骤；

4）将α2A受体拮抗剂BRL44408以浓度0.2 ~ 25000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的微孔板中，预处理5 ~ 60 min，加入与步骤2）中相同浓度的待测样品，检测其DMR信号，若此DMR信号强度低于步骤2）中的DMR信号强度，则判断此样品为α2A受体的激动剂。

3.根据权利要求1所述一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品具有拮抗活性的筛选步骤如下：

1）将待测样品和肾上腺素或Guanfacine分别加入到接种HEK-293-α2A细胞的微孔板中，待测样品浓度为0.01 nM ~ 100 µM，肾上腺素或Guanfacine浓度为1.2 ~ 10000 nM，检测DMR信号谱；

2）若步骤1）中待测样品不引起DMR信号谱，再向步骤1）中加入了待测样品的细胞板中继续加入与步骤1）中相同浓度的肾上腺素或Guanfacine，检测DMR信号谱；若此DMR信号比步骤1）中肾上腺素或Guanfacine的信号弱，可判断待测样品是α2A受体的拮抗剂。

4.根据权利要求1所述一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品对α2A肾上腺素受体通路有调节活性的步骤如下：

1）将待测样品和肾上腺素或Guanfacine分别加入到接种HEK-293-α2A细胞的微孔板中，待测样品浓度为0.01 nM ~ 100 µM，肾上腺素或Guanfacine浓度为1.2 ~ 10000 nM，检测DMR信号谱；

2）再向步骤1）中加入了待测样品的细胞板中继续加入与步骤1）中相同浓度的肾上腺素或Guanfacine，检测DMR信号谱，检测时间为1 ~ 60 min；若此DMR信号比步骤1）中肾上腺素或Guanfacine的信号在上升期、平台期和延滞期某一个阶段不同；

3）将α2A受体拮抗剂BRL44408以浓度0.2 ~ 25000 nM加入到接种HEK-293-α2A细胞的微孔板中，预处理5 ~ 60 min，加入与步骤1）中相同浓度的待测样品，检测其DMR信号，若此DMR信号谱与步骤1）中的样品的DMR信号谱一致，判断待测样品是α2A受体下游信号通路的调节剂。

5.根据权利要求4所述一种α2A肾上腺素受体的细胞筛选模型，其特征在于，所述上升期为1 ~ 40 min、平台期为40 ~ 50 min和延滞期为50 ~ 60 min。